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cuicchao

金虫 (正式写手)

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[交流] 奇怪的连接反应

大家好！近来在做目的基因和质粒的连接，在转化时出现了一个奇怪的现象，请教大家分析下。我回收的目的基因和载体都还是比较纯的（用的是OMEGA试剂盒提取的)。我用TAKARA的solution1，16摄氏度，45min连接，之后直接转化DH5阿尔法，我做了全菌的PCR，再提取质粒PCR结果都有正确的结果，但是我跑质粒和双酶切的核算电泳胶都没有条带。这是问什么呢？！！！

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1楼 2013-03-08 10:33:17

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cuicchao

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引用回帖:

15楼: Originally posted by 逆天打酱油 at 2013-03-09 12:26:59
全菌PCR有可能是连接转化过程中连接使用的片段有沾到菌体上造成污染

至于卤煮说提取质粒后PCR也有片段，这个看来可以排除上面的情况，但是会怀疑有可能是PCR使用的试剂有污染，建议卤煮设置负对照，譬如空载为模 ...

恩，这样不错，我下次做的时候设几个对照，谢谢了！另外我说的没条带意思是什么也没有。