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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录一直不成功
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hardytam

铁虫 (初入文坛)

[求助] 反转录一直不成功 已有6人参与

RNA的质量都不错，TRIZOL方法提取的，反转录一直不成功，Takara试剂盒用过了，逆转录酶也都用过了（takara，promega，toyobo），但是一直都不成功，是不是我在提取RNA的过程中人为的忽略了什么？影响了后面的逆转录？
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1楼 2014-03-11 11:36:10
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shengwumin

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 12:03:42
1.RNA你跑个胶或者定量。确定提RNA这步没问题。
2.反转录的时候你有按照说明书去操作吗？模版RNA量够吗？反转录酶你保存的是否很好？反应温度等等。
3.反转录后的cDNA定量一次。看看反转录效率。
这些都是些细节问题，最要注意的是，你所有所用的试剂是否已经混匀。
祝福楼主，早日解决这些问题。
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believeyourself! come on .
6楼2014-03-12 08:57:54
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showman1989

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是怎么确定不成功的，做了定量了还是？
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广交天下有才之士！绝不虚度人生。
2楼2014-03-11 12:39:54
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划过星空2009

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by showman1989 at 2014-03-11 12:39:54
你是怎么确定不成功的，做了定量了还是？

是啊～你确定是提取RNA时有问题吗？？？

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-03-11 13:45:27
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你确定是提取的问题而不是反转录的问题吗？
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4楼2014-03-11 15:46:05
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