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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录一直不成功
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hardytam

铁虫 (初入文坛)

[求助] 反转录一直不成功 已有6人参与

RNA的质量都不错，TRIZOL方法提取的，反转录一直不成功，Takara试剂盒用过了，逆转录酶也都用过了（takara，promega，toyobo），但是一直都不成功，是不是我在提取RNA的过程中人为的忽略了什么？影响了后面的逆转录？
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1楼 2014-03-11 11:36:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shengwumin

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 12:03:42
1.RNA你跑个胶或者定量。确定提RNA这步没问题。
2.反转录的时候你有按照说明书去操作吗？模版RNA量够吗？反转录酶你保存的是否很好？反应温度等等。
3.反转录后的cDNA定量一次。看看反转录效率。
这些都是些细节问题，最要注意的是，你所有所用的试剂是否已经混匀。
祝福楼主，早日解决这些问题。
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believeyourself! come on .
6楼2014-03-12 08:57:54
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你确定是提取的问题而不是反转录的问题吗？
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4楼2014-03-11 15:46:05
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毛芋头

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by hardytam at 2014-03-12 12:17:32
恩 谢谢 上面提到的都是问题，过程中好像也都注意了，只有再试下了...

你的内参引物有没有问题？
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10楼2014-03-13 16:32:53
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liurtxm

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:25:33
什么叫 反转录不成功阿？ 还有RNA 质量不错 你是依据什么得出的结论？ 最好上图，把问题说得清楚一点。
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啊哈哈
13楼2014-03-14 00:00:24
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普通回帖

showman1989

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是怎么确定不成功的，做了定量了还是？
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广交天下有才之士！绝不虚度人生。
2楼2014-03-11 12:39:54
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划过星空2009

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by showman1989 at 2014-03-11 12:39:54
你是怎么确定不成功的，做了定量了还是？

是啊～你确定是提取RNA时有问题吗？？？

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-03-11 13:45:27
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showman1989

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 划过星空2009 at 2014-03-11 13:45:27
是啊～你确定是提取RNA时有问题吗？？？
...

提前的RNA可以跑胶看看怎么样，有没有降解
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广交天下有才之士！绝不虚度人生。
5楼2014-03-11 21:07:13
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
找对内参引物试试cDNA成不成功

[ 发自小木虫客户端 ]
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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
7楼2014-03-12 11:02:45
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hardytam

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 划过星空2009 at 2014-03-11 13:45:27
是啊～你确定是提取RNA时有问题吗？？？
...

应该不是，提取的结果蛮好的哎
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8楼2014-03-12 12:13:59
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hardytam

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shengwumin at 2014-03-12 08:57:54
1.RNA你跑个胶或者定量。确定提RNA这步没问题。
2.反转录的时候你有按照说明书去操作吗？模版RNA量够吗？反转录酶你保存的是否很好？反应温度等等。
3.反转录后的cDNA定量一次。看看反转录效率。
这些都是些细节 ...

恩 谢谢 上面提到的都是问题，过程中好像也都注意了，只有再试下了
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9楼2014-03-12 12:17:32
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