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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 它怎么就反转录不出来，求教
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7788945

银虫 (小有名气)

[交流] 它怎么就反转录不出来，求教

提了几个RNA样品，电泳结果还不错，蛋白和DNA非常少，28S：18S也接近2：1，OD检测260/280都在1.95和2.00之间，260/230小了点，1.7左右，但是提了N次RNA，也反转了N次了，有的时候260/230连1.5都不到，反转录都没问题，这次就是反转不出来，哪位提个醒，反转录还有什么隐藏的敌人没抓出来

[ Last edited by wanhscn on 2011-9-15 at 08:47 ]
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1楼 2011-09-14 22:12:37
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博杰冲

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你用的试剂有没有换过啊？
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2楼2011-09-15 08:20:12
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 博杰冲 at 2011-09-15 08:20:12:
你用的试剂有没有换过啊？

木有啊，同一批的试剂
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3楼2011-09-16 17:46:29
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+1): 很活跃啊 2011-09-17 08:37:56
试剂放久了失活也有可能的哦，你用同样的步骤再反转一次，温度和转录时间都和以前一致，换一批试剂试试，实在不行就只能怀疑RNA抽提了。
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4楼2011-09-16 22:43:49
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7788945

银虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎把经验分享出来，鼓励重新开贴探讨 2011-09-19 07:49:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by cloverplm at 2011-09-16 22:43:49:
试剂放久了失活也有可能的哦，你用同样的步骤再反转一次，温度和转录时间都和以前一致，换一批试剂试试，实在不行就只能怀疑RNA抽提了。

又重新提取了，应该是小分子的原因，反转录出来的260/230都大于1.8，低于1.8的有一个算一个，全不出，1.75的也不出。以前提完RNA反转录没这么苛刻
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5楼2011-09-18 20:57:34
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