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7788945

银虫 (小有名气)


[交流] 它怎么就反转录不出来,求教

提了几个RNA样品,电泳结果还不错,蛋白和DNA非常少,28S:18S也接近2:1,OD检测260/280都在1.95和2.00之间,260/230小了点,1.7左右,但是提了N次RNA,也反转了N次了,有的时候260/230连1.5都不到,反转录都没问题,这次就是反转不出来,哪位提个醒,反转录还有什么隐藏的敌人没抓出来

[ Last edited by wanhscn on 2011-9-15 at 08:47 ]
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博杰冲

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你用的试剂有没有换过啊?
2楼2011-09-15 08:20:12
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7788945

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 博杰冲 at 2011-09-15 08:20:12:
你用的试剂有没有换过啊?

木有啊,同一批的试剂
3楼2011-09-16 17:46:29
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cloverplm

金虫 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(金币+1): 很活跃啊 2011-09-17 08:37:56
试剂放久了失活也有可能的哦,你用同样的步骤再反转一次,温度和转录时间都和以前一致,换一批试剂试试,实在不行就只能怀疑RNA抽提了。
4楼2011-09-16 22:43:49
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7788945

银虫 (小有名气)


★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎把经验分享出来,鼓励重新开贴探讨 2011-09-19 07:49:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by cloverplm at 2011-09-16 22:43:49:
试剂放久了失活也有可能的哦,你用同样的步骤再反转一次,温度和转录时间都和以前一致,换一批试剂试试,实在不行就只能怀疑RNA抽提了。

又重新提取了,应该是小分子的原因,反转录出来的260/230都大于1.8,低于1.8的有一个算一个,全不出,1.75的也不出。以前提完RNA反转录没这么苛刻
5楼2011-09-18 20:57:34
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