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hardytam

铁虫 (初入文坛)

[求助] 反转录一直不成功 已有6人参与

RNA的质量都不错,TRIZOL方法提取的,反转录一直不成功,Takara试剂盒用过了,逆转录酶也都用过了(takara,promega,toyobo),但是一直都不成功,是不是我在提取RNA的过程中人为的忽略了什么?影响了后面的逆转录?
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hardytam

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 划过星空2009 at 2014-03-11 13:45:27
是啊~你确定是提取RNA时有问题吗???
...

应该不是,提取的结果蛮好的哎
8楼2014-03-12 12:13:59
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hardytam

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by shengwumin at 2014-03-12 08:57:54
1.RNA你跑个胶或者定量。确定提RNA这步没问题。
2.反转录的时候你有按照说明书去操作吗?模版RNA量够吗?反转录酶你保存的是否很好?反应温度等等。
3.反转录后的cDNA定量一次。看看反转录效率。
这些都是些细节 ...

恩 谢谢 上面提到的都是问题,过程中好像也都注意了,只有再试下了
9楼2014-03-12 12:17:32
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