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hardytam

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 6.3
帖子: 50
在线: 18.9小时
虫号: 2457883
注册: 2013-05-10
性别: GG
专业: 人类遗传学

[求助] 反转录一直不成功已有6人参与

RNA的质量都不错，TRIZOL方法提取的，反转录一直不成功，Takara试剂盒用过了，逆转录酶也都用过了（takara，promega，toyobo），但是一直都不成功，是不是我在提取RNA的过程中人为的忽略了什么？影响了后面的逆转录？

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1楼 2014-03-11 11:36:10

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shengwumin

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1649.7
散金: 140
红花: 1
帖子: 211
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虫号: 1990251
注册: 2012-09-10
性别: MM
专业: 蛋白质组学

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 12:03:42

1.RNA你跑个胶或者定量。确定提RNA这步没问题。
2.反转录的时候你有按照说明书去操作吗？模版RNA量够吗？反转录酶你保存的是否很好？反应温度等等。
3.反转录后的cDNA定量一次。看看反转录效率。
这些都是些细节问题，最要注意的是，你所有所用的试剂是否已经混匀。
祝福楼主，早日解决这些问题。

赞一下(3人)

believeyourself! come on .

6楼2014-03-12 08:57:54

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