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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 超滤离心后蛋白降解了
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梦在农大

银虫 (正式写手)

[求助] 超滤离心后蛋白降解了 已有5人参与

我离心浓缩后蛋白（这是个有争议的膜蛋白）会降解。这是什么原因。（因为我纯化后得到几十毫升的溶液（250mM的咪唑），分几次加进去离心，直到想要的体积）。
是不是我往离心后的溶液中加入了新的溶液导致的？

超滤离心管，离心时间和离心力对蛋白有伤害吗？ 谢谢
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1楼 2014-03-10 18:01:01
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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1、超滤管是不是被污染了，一般纯度越高的蛋白，越不容易降解。
2、稀释一下再上镍柱或者离子柱，用高浓度咪唑，高浓度盐一下子全冲下来，不就浓缩了。
3、直接硫酸铵沉淀，然后再小体积复溶。
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5楼2014-04-28 21:50:51
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-10 18:19:38
梦在农大: 金币+1, ★有帮助, 我用蛋白是做一些结合试验 所以还是少加东西。您觉得 不是我提的这两个问题 2014-03-10 19:58:49
我感觉伤害不大。建议你添加一些蛋白酶抑制剂。如果还是降解的话，可能就是蛋白自身的性质。
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2楼2014-03-10 18:13:11
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yuting916468

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
梦在农大: 金币+1, ★有帮助, 超滤管不也可以除盐吗 透析时间太久了 对保存蛋白不利吧 2014-03-11 14:12:06
请问你的目的是浓缩还是除盐，如果只是浓缩的话建议先透析或脱盐柱除咪唑。因为你在浓缩的过程中盐浓度过高，可能导致蛋白沉淀。不过这也与蛋白性质有关。
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3楼2014-03-11 10:42:53
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

★
梦在农大: 金币+1, ★有帮助, 我是3500g。 看你实验要求如果 可以考虑加点甘油 2014-04-28 21:06:45
你是不是4℃离心，转速不要太高，我做的纯化蛋白透析完后，浓缩离心。转速4000g。太大蛋白损失太多。也不好不过浓缩粉耗时间大概要2到3个小时。但是我的蛋白存放现在出现问题。4度容易降解，-20容易沉淀。楼主加油
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
4楼2014-04-28 11:15:54
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