应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 超滤离心后蛋白降解了
51/1返回列表
查看: 2324  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

梦在农大

银虫 (正式写手)

[求助] 超滤离心后蛋白降解了 已有5人参与

我离心浓缩后蛋白（这是个有争议的膜蛋白）会降解。这是什么原因。（因为我纯化后得到几十毫升的溶液（250mM的咪唑），分几次加进去离心，直到想要的体积）。
是不是我往离心后的溶液中加入了新的溶液导致的？

超滤离心管，离心时间和离心力对蛋白有伤害吗？ 谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-10 18:01:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuting916468

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
梦在农大: 金币+1, ★有帮助, 超滤管不也可以除盐吗 透析时间太久了 对保存蛋白不利吧 2014-03-11 14:12:06
请问你的目的是浓缩还是除盐，如果只是浓缩的话建议先透析或脱盐柱除咪唑。因为你在浓缩的过程中盐浓度过高，可能导致蛋白沉淀。不过这也与蛋白性质有关。
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-11 10:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-10 18:19:38
梦在农大: 金币+1, ★有帮助, 我用蛋白是做一些结合试验 所以还是少加东西。您觉得 不是我提的这两个问题 2014-03-10 19:58:49
我感觉伤害不大。建议你添加一些蛋白酶抑制剂。如果还是降解的话，可能就是蛋白自身的性质。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-10 18:13:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

★
梦在农大: 金币+1, ★有帮助, 我是3500g。 看你实验要求如果 可以考虑加点甘油 2014-04-28 21:06:45
你是不是4℃离心，转速不要太高，我做的纯化蛋白透析完后，浓缩离心。转速4000g。太大蛋白损失太多。也不好不过浓缩粉耗时间大概要2到3个小时。但是我的蛋白存放现在出现问题。4度容易降解，-20容易沉淀。楼主加油
赞一下 回复此楼
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
4楼2014-04-28 11:15:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1、超滤管是不是被污染了，一般纯度越高的蛋白，越不容易降解。
2、稀释一下再上镍柱或者离子柱，用高浓度咪唑，高浓度盐一下子全冲下来，不就浓缩了。
3、直接硫酸铵沉淀，然后再小体积复溶。
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-28 21:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭