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悠悠米

新虫 (初入文坛)

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[求助] C41表达重组蛋白已有2人参与

之前用pET28a连了个基因，在BL21表达，但是基本都是包涵体，这次换了C41，把之前的重组载体转进去，发现根本不长！！！想知道怎么回事，求大神指导！跪谢~~~

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1楼 2014-03-04 10:04:05

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woolley

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-11 13:34:36

看你是做结构的，你优化的目的应该是得到可溶表达
首先你应该大致的分析一下导致包涵体的原因
C41宿主菌主要是用来表达有毒蛋白和膜蛋白的，如果你的蛋白不属于这些类型，C41宿主的帮助不大
Origami宿主菌是氧化型的胞内环境，主要用于带有二硫键蛋白的表达，有助于形成正确的二硫键
你说到基本上全是包涵体，意味着可能还有一小部分的胞质，如果有的话，建议首先尝试降低表达温度，总体来说，温度对增加胞质的贡献最大。
如果没有宿主菌可以选择，可以尝试更换载体，融合表达，或者优化培养基（加入甘油、甜菜碱等会有些帮助的）
最后，也可以考虑一下变复性