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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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赵晓楠zxn

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 基因扩不出来 已有4人参与

我有紫花苜蓿某个基因一段不完整的序列,blast结果显示蒺藜苜蓿与它同源性较高,为98%。根据蒺藜苜蓿完整的mRNA(大小为3310bp)设计引物,以紫花苜蓿的cDNA为模板,为什么扩不出来目的片段?
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赵晓楠zxn

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-03 19:02:01
1、RNA抽的不好
2、引物设计的不好
3、实验操作技能可能存在问题
4、降低退火温度试试

用同样的的模板扩过其他基因,能扩出来。至于引物,用过四对,出现过比它小1000bp的片段,其他引物都只产生了引物二聚体。退火温度,也试着降低过,仍旧扩不出来。ps:这个基因表达量不高,但是不至于扩不出来吧。
在学术的汪洋里,扑腾。
5楼2014-03-04 09:34:48
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西门吹雪170

禁虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-04 08:42:12
赵晓楠zxn: 金币+3, 有帮助 2014-03-04 09:50:55
1、RNA抽的不好
2、引物设计的不好
3、实验操作技能可能存在问题
4、降低退火温度试试
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-03 19:02:01
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lvbobo823

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-04 08:42:15
赵晓楠zxn: 金币+3 2014-03-04 09:51:04
确定一下该基因表大么?再一个根据保守区段多设计几对引物,一定不要再UTR区域设计那地差异太大。
hehe
3楼2014-03-03 20:19:35
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acer_hp

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-04 08:42:19
赵晓楠zxn: 金币+3, 有帮助 2014-03-04 09:51:20
是不是太长了不好扩,要不换一种专门扩增长片段的酶,或者分两段扩增。
4楼2014-03-03 21:52:12
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