应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western-blot的问题！！！
51/1返回列表
查看: 1918  |  回复: 5
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lxyzsx

新虫 (初入文坛)

[求助] western-blot的问题！！！已有4人参与

各位大神，你们好：

    小弟最近做目的蛋白WB检测，从植物种子中粗提蛋白，两块胶，一快染色，一快WB。
    问题是：阳性对照有条带，很清晰（阳性对照为纯化的蛋白），而检测的蛋白却没有条带，而用ELISA检测同样的检测样品，结果呈阳性。为什么ELISA能检测出来，而WB检测不出来呢？
    上样量做过梯度，转膜电流、时间也摸索过
    但是为什么会出现这种情况呢？还请各位大神显灵吧，小弟拜谢了！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-02-25 19:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puhebio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ELISA和WB的灵敏度完全不是一个级别，Elisa的检测限可以达到ng级别，可能是你的目的蛋白量比较少，上样量的摸索时，你所看到的条带多数是你的杂蛋白，另外转膜后面加抗体孵育、显色的时候也查查有没有问题。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2014-02-25 22:24:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

hellokkzhu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般情况，elisa的灵敏度比wb要高100-1000倍，所以elisa有阳性结果wb不一定检测到条带。如果蛋白较小比如10kd以下，wb的检测更不灵敏。
建议：用纯化蛋白作为标准品做elisa定量，看你的目的蛋白丰度，如果丰度低可以加大上样量，提高抗体工作液浓度。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-02-25 20:04:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxyzsx

新虫 (初入文坛)
ok,再试试上样量，和一抗fuyu时间，谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-26 06:41:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

turnaward

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

他们的作用好像不是一样的吧！wb是和变性的蛋白结合的而elise却不是的。所以可能和你的抗体有关的吧。如果不是这个原因找到了给我回一下的哈、
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-28 22:10:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭