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lxyzsx

新虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 5.3
帖子: 12
在线: 1.4小时
虫号: 2383939
注册: 2013-03-28
专业: 抗体工程学

[求助] western-blot的问题！！！已有4人参与

各位大神，你们好：

小弟最近做目的蛋白WB检测，从植物种子中粗提蛋白，两块胶，一快染色，一快WB。
问题是：阳性对照有条带，很清晰（阳性对照为纯化的蛋白），而检测的蛋白却没有条带，而用ELISA检测同样的检测样品，结果呈阳性。为什么ELISA能检测出来，而WB检测不出来呢？
上样量做过梯度，转膜电流、时间也摸索过
但是为什么会出现这种情况呢？还请各位大神显灵吧，小弟拜谢了！

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1楼 2014-02-25 19:31:21

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puhebio

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2995424
注册: 2014-02-25

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

ELISA和WB的灵敏度完全不是一个级别，Elisa的检测限可以达到ng级别，可能是你的目的蛋白量比较少，上样量的摸索时，你所看到的条带多数是你的杂蛋白，另外转膜后面加抗体孵育、显色的时候也查查有没有问题。

赞一下(2人)

3楼2014-02-25 22:24:25

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