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liang316

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1504211
注册: 2011-11-22
性别: GG
专业: 作物种质资源与遗传育种学

[求助] 真菌克隆测序的问题已有1人参与

前段时间在病株上分离出一种未知的真菌，想确定它是什么菌，于是打算测序一下，但送样到生物公司却说提取不了质粒，测不了，实在纠结~~~我是首先提取了真菌的DNA，然后切胶回收目的条带，用回收的DNA做克隆，以PMD18为载体，DH5α 为感受态细胞，蓝白斑筛选，最后把菌液送去测序，我重做了几次，生物公司都还是说提取不了质粒T^T
1. 这是不是说明我的菌没有成功克隆上呢，是实验步骤出了问题吗，但师兄以前都是用这个方法做测序的，都成功了
2. 回收的DNA跑过电泳，条带还比较亮，克隆后用菌液去跑电泳，也有条带，但已经暗了很多，这是不是出了问题呢
3. 用的回收试剂、载体、感受态细胞都是新的
真的想破了头了，实验都拖了好一段时间了，希望有经验的大神们能解答一下小妹的问题，万分感谢啊~~T^T

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