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liang316银虫 (小有名气)
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[求助]
真菌克隆测序的问题 已有1人参与
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前段时间在病株上分离出一种未知的真菌，想确定它是什么菌，于是打算测序一下，但送样到生物公司却说提取不了质粒，测不了，实在纠结~~~我是首先提取了真菌的DNA，然后切胶回收目的条带，用回收的DNA做克隆，以PMD18为载体，DH5α 为感受态细胞，蓝白斑筛选，最后把菌液送去测序，我重做了几次，生物公司都还是说提取不了质粒T^T 1. 这是不是说明我的菌没有成功克隆上呢，是实验步骤出了问题吗，但师兄以前都是用这个方法做测序的，都成功了 2. 回收的DNA跑过电泳，条带还比较亮，克隆后用菌液去跑电泳，也有条带，但已经暗了很多，这是不是出了问题呢 3. 用的回收试剂、载体、感受态细胞都是新的 真的想破了头了，实验都拖了好一段时间了，希望有经验的大神们能解答一下小妹的问题，万分感谢啊~~T^T |
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lvbobo823
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2楼2014-02-24 12:13:23