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henghengyouyou银虫 (正式写手)
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质粒测序无信号，为啥？ 已有3人参与
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各位，最近我做了PCR产物纯化，加A，连接TA vector,挑单克隆，提取质粒准备送去测序。 单克隆菌液PCR都为阳性，抽提质粒后也表明重组质粒要比空载质粒大很多，应该是片段克隆进入载体了。 但是为啥我用引物测序无信号呢，包括通用引物和克隆引物？什么情况？ |
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henghengyouyou
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5楼2014-02-13 22:13:31
wangdunzju
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:22:06
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可以从两个方面分析; 第一种情况：PCR产物不纯，连入载体的不是目的序列，这需要你用通用引物和特异引物分别PCR检测可以判断是不是这种情况。检测最好用菌液PCR，不用菌斑PCR。 第二种情况：插入片段是你的目的片段，但后期出问题了，比如，摇菌的菌株有污染，（如培养基污染了别人的菌，也有抗性）。再或者摇菌的浓度太稀，也测不出来，这可能是测序那边的问题。还有你的载体是不是用对了，要是这个都搞错了，估计也会遇到类似问题出现。 祝好运！ |
2楼2014-02-13 10:32:28
wangdunzju
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3楼2014-02-13 10:34:30
lvbobo823
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4楼2014-02-13 10:44:32
50