应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 质粒测序无信号，为啥？
61/1返回列表
查看: 6305  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

henghengyouyou

银虫 (正式写手)

[求助] 质粒测序无信号，为啥？ 已有3人参与

各位，最近我做了PCR产物纯化，加A，连接TA vector,挑单克隆，提取质粒准备送去测序。
单克隆菌液PCR都为阳性，抽提质粒后也表明重组质粒要比空载质粒大很多，应该是片段克隆进入载体了。
但是为啥我用引物测序无信号呢，包括通用引物和克隆引物？什么情况？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验求助

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-13 06:20:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdunzju

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-02-15 10:36:22
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:22:06
可以从两个方面分析;
第一种情况：PCR产物不纯，连入载体的不是目的序列，这需要你用通用引物和特异引物分别PCR检测可以判断是不是这种情况。检测最好用菌液PCR，不用菌斑PCR。

第二种情况：插入片段是你的目的片段，但后期出问题了，比如，摇菌的菌株有污染，（如培养基污染了别人的菌，也有抗性）。再或者摇菌的浓度太稀，也测不出来，这可能是测序那边的问题。还有你的载体是不是用对了，要是这个都搞错了，估计也会遇到类似问题出现。
祝好运！
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-13 10:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdunzju

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
henghengyouyou: 金币+1 2014-02-13 22:12:50
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 10:36:35
另外，载体的质量也很关键，TAKARA或者英骏的T载体都还好。
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-13 10:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-02-15 10:36:44
测序无信号，你通用引物最起码会出现载体片段序列。可能你送的样品有问题。会不会送错了。你再重新提一次质粒测一下序。
赞一下 回复此楼
hehe
4楼2014-02-13 10:44:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henghengyouyou

银虫 (正式写手)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-15 10:36:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangdunzju at 2014-02-13 10:34:30
另外，载体的质量也很关键，TAKARA或者英骏的T载体都还好。

说实话，载体是10年前的了，偶尔好用，偶尔不好用。郁闷！
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-13 22:13:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mao081312

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:22:21
空质粒和重组质粒都是多大呢？通用引物都没有测序信号，说明肯定不会是你有没有连上这个问题，而是你质粒的问题，你可以把你的空质粒送去测序，看质粒上是否有相应的序列
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-15 11:37:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 henghengyouyou 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭