| 查看: 5951 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
henghengyouyou银虫 (正式写手)
|
[求助]
质粒测序无信号，为啥？ 已有3人参与
|
||
|
各位，最近我做了PCR产物纯化，加A，连接TA vector,挑单克隆，提取质粒准备送去测序。 单克隆菌液PCR都为阳性，抽提质粒后也表明重组质粒要比空载质粒大很多，应该是片段克隆进入载体了。 但是为啥我用引物测序无信号呢，包括通用引物和克隆引物？什么情况？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验求助 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有173人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用的pCDNA-5重组质粒，通过测序检验质粒+目的基因是否构建成功
已经有5人回复
- 质粒测序 pcr产物ta克隆后送去测序 为什么要测双向
已经有6人回复
- 请教克隆步骤做到质粒大抽测序了，之后接着要做什么？？？
已经有3人回复
- 测序质粒提不出来
已经有6人回复
- 请教不知道质粒信息的情况下，怎样设计引物来进行测序
已经有7人回复
- PCR条带很亮，但测序没信号
已经有12人回复
- 质粒浓度很低 无法测序 求挽救措施
已经有10人回复
- 质粒ＰＣＲ扩不出目的条带，且有杂带，但是直接测序有结果？为什么？？？？？
已经有7人回复
- 质粒测序后发现有重叠现象
已经有13人回复
- TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？
已经有11人回复
- 测序结果——无信号！ 是什么原因？？？
已经有11人回复
- 质粒测序鉴定条带弱无法测序，求指点
已经有9人回复
- 【求助/交流】质粒浓度达到多少 测序没有问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒无测序引物可以测序么？
已经有14人回复
- 【求助/交流】质粒测序正确，蛋白无法表达
已经有5人回复
- 【求助/交流】质粒测序没结果，希望高手们解答！
已经有15人回复
- 【求助/交流】刚买的质粒，用之前需要测序不？
已经有8人回复
- 【求助/交流】测序信号弱
已经有6人回复
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2014-02-13 10:44:32
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-02-15 10:36:22
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:22:06
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-02-15 10:36:22
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:22:06
|
可以从两个方面分析; 第一种情况：PCR产物不纯，连入载体的不是目的序列，这需要你用通用引物和特异引物分别PCR检测可以判断是不是这种情况。检测最好用菌液PCR，不用菌斑PCR。 第二种情况：插入片段是你的目的片段，但后期出问题了，比如，摇菌的菌株有污染，（如培养基污染了别人的菌，也有抗性）。再或者摇菌的浓度太稀，也测不出来，这可能是测序那边的问题。还有你的载体是不是用对了，要是这个都搞错了，估计也会遇到类似问题出现。 祝好运！ |
2楼2014-02-13 10:32:28
wangdunzju
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 281.9
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 13.9小时
- 虫号: 1087999
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2014-02-13 10:34:30
henghengyouyou
银虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 338.5
- 散金: 238
- 红花: 6
- 帖子: 513
- 在线: 193小时
- 虫号: 462712
- 注册: 2007-11-19
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2014-02-13 22:13:31
50