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qin.xiaoyue

铁虫 (初入文坛)

[求助] TAIL-PCR的相关问题 已有2人参与

我用的载体是根据pPZPY122载体改造的,称为pF3PZPY122,不知道其具体载体序列。做TAIL-PCR时用的方法是根据Fusion primer and nested integrated PCR
(FPNI-PCR): a new high-efficiency strategy for rapid chromosome walking or flanking sequence cloning文献报道的FPNI-PCR方法。特异引物的设计是根据pPZPY122载体序列靠近RB区域设计的向外扩增的引物,经过3轮PCR之后得到了1000bp左右很特异的条带,但是测序却得到了RB上游的载体上的序列(距离RB约2K),有人遇到过相同的情况吗?求大神帮忙。
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-10 23:22:40
tail pcr经常出现扩出的片段是已知片段内序列,建议你再设计一些特异引物再做一次。
hehe
2楼2014-01-10 17:04:05
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qin.xiaoyue

铁虫 (初入文坛)

好的,非常感谢!但是应该怎样设计呢?我设计的是靠近RB区域的,要从中间设计吗?
3楼2014-01-10 20:57:03
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马里奥的夏天

新虫 (初入文坛)

我也想做这个实验,请问随机引物是自己设计的还是按照那篇文献上合成的,希望能请教一下。
4楼2014-07-07 19:58:35
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liluocheng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主你好,请问你有pF3PZPY122载体的图谱么,能发给我一份么,拜托拜托!
5楼2019-11-19 16:23:15
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