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李金娜322

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于磷酸化蛋白质SDS-PAGE电泳图 已有3人参与

我是提磷酸化蛋白质的~~这是我提完蛋白质的SDS-PAGE凝胶电泳图片 但不知道为什么会这样  请求高手指教
关于磷酸化蛋白质SDS-PAGE电泳图
ljn.jpg
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zhixuec

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一张是因为你的上样孔脏东西、杂质颗粒造成的,以前我也遇到到,一定要把梳子洗干净了再用

第二张图 上面都有说的,就是样品含有太多杂质,不知道你用什么buffer沉淀的蛋白,若是TCA-丙酮的话,可能是丙酮没有挥发干净

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

酷爱の族
6楼2014-01-10 09:24:30
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albertcalvin

新虫 (初入文坛)

首先是配好胶,其次,电泳buffer过一次滤膜可能会有点效果

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

世界上最美的花朵是人的头脑
11楼2014-08-13 19:02:47
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普通回帖

tingyusu

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看到你的第一张图片条带明显有竖着的条纹,估计是你的胶没有做好吧。同求高手指点~
2楼2014-01-09 19:13:39
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

没有MARKER吗?可能胶的质量不好,另外,样品感觉很杂,好像有很多多糖或甘油啊,从头拖到尾。
建议,重新配胶吧,样品用超滤管过一下,除除杂质。
同求高手指点~
3楼2014-01-09 19:28:54
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suwc2013

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-09 23:03:57
李金娜322: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-10 14:32:49
1、可能你的蛋白溶液里含盐较高 2、还有你上样量减少点3、跑胶的buffer用新的不要用旧的,祝福楼主。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

。。。。。。。。
4楼2014-01-09 19:32:37
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suwc2013

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你的蛋白溶液可能有triton  感觉的蛋溶液挺杂的
。。。。。。。。
5楼2014-01-10 09:04:27
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李金娜322

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tingyusu at 2014-01-09 19:13:39
看到你的第一张图片条带明显有竖着的条纹,估计是你的胶没有做好吧。同求高手指点~

谢谢您

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2014-01-10 10:51:40
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李金娜322

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-09 19:28:54
没有MARKER吗?可能胶的质量不好,另外,样品感觉很杂,好像有很多多糖或甘油啊,从头拖到尾。
建议,重新配胶吧,样品用超滤管过一下,除除杂质。
同求高手指点~

谢谢您
8楼2014-01-10 14:23:09
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李金娜322

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by suwc2013 at 2014-01-09 19:32:37
1、可能你的蛋白溶液里含盐较高 2、还有你上样量减少点3、跑胶的buffer用新的不要用旧的,祝福楼主。

buffer 确实是旧的
9楼2014-01-10 14:24:10
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李金娜322

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhixuec at 2014-01-10 09:24:30
第一张是因为你的上样孔脏东西、杂质颗粒造成的,以前我也遇到到,一定要把梳子洗干净了再用

第二张图 上面都有说的,就是样品含有太多杂质,不知道你用什么buffer沉淀的蛋白,若是TCA-丙酮的话,可能是丙酮没有 ...

我用抽酚法提的磷酸化蛋白质  提完后需要用丙酮洗 可能是丙酮没有挥发干净 我提完蛋白质需要抽真空抽成干粉 之后在复溶 也是不知道那个环节出问题了~~·谢谢您的宝贵意见
10楼2014-01-10 14:27:52
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