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冷雁孤旅木虫 (著名写手)
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[求助]
关于细菌RNA德 提取
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 最近在做细菌RNA提取，使用trizol法，提取细菌的总RNA，降解厉害，想从内源性酶着手来降低RNA的降解，说明书要求每5×10^6个细胞加1 ml的trizol, 我为了提高RNA的总量，我在每10^10个细胞中加入1.5ml的trizol，请问大家1. trizol过少，会不会导致其对于酶的抑制抑制作用不够，使得RNA大量降解，反而使得RNA质量不高啊？ 2.还有就是听师兄说，加入trizol不用按照说明书上的要求来做，把细胞浓度提高一些，但是这个浓度的上限是多少？ 3.诸位，一般是多少的细菌加入1ml 的trizol 合适啊？ 4.在吸取上清液的时候，一般是吸多少合适？（我一般是吸上清总量的2/3左右，是不是太多了，我尽可能不吸到蛋白沉淀）但是在离心沉淀后，说明书上说可以看到RNA沉淀，事实上我看到了白色的沉淀，查阅资料后有人说那是蛋白质的沉淀，以及多糖还有RNA的复合物，纯净的RNA在离心的时候是否能看到沉淀？ 非常感谢诸位了。 |
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