应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的基础问题
141/2返回列表12下一页
查看: 1707  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

a770992409

新虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR的基础问题 已有4人参与

请教一下：1.PCR中引物是不是不能和poly A的模板结合？如果用的是taq 酶，poly A模板的AAAA……A会不会被切掉？
                  2.如果参考文献的方法要得到的双链不一样长（类似于有粘性末端），怎么证明我得到了这样双链产物？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-05 15:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a770992409

新虫 (小有名气)
只有机器人回答我的帖子吗，好凄凉
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-05 16:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-05 18:43:50
1. 如果你设计引物为oligoT，就可以与polyA模板结合了。没听说Taq酶有外切功能。
2. 好像没有听说可以得到不一样的长的双链。除非你只做一个循环。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-05 18:04:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyl121

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-07 10:28:17
楼主啊，你这个问题有点不太明了
1.poly A模板没有这个吧，在DNA中有AAAAA的序列的话，你可以配对的设计，但是必然会形成引物二聚体的
   同时，POLYA是后期加上去的，如果你是用CDNA，那你是去掉这个结构的
2.如果双链不一样长，那个在DNA中也是看不到的，因为扩出来最多的是两引物的重复片段，所以不会出现，怎么样判定，我觉得你设计引物时将片段包括进去就可，酶切
赞一下 回复此楼
不经一番寒彻骨，怎得梅花扑鼻香？为科学进步不懈努力
4楼2014-01-05 21:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m602010145

新虫 (初入文坛)
这个问题太2
回复此楼
时间无法为你停留，但你可以追上时间的脚步。
5楼2014-01-06 13:24:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a770992409

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-05 18:04:59
1. 如果你设计引物为oligoT，就可以与polyA模板结合了。没听说Taq酶有外切功能。
2. 好像没有听说可以得到不一样的长的双链。除非你只做一个循环。

1.你的意思是说如果模板是polyA，是可以被扩增出来的？我周围的人告诉我taq酶不能和AAA这样的序列结合，所以有此疑问
2.就先假定有方法可以得到，那么怎么证明得到了？我现在用的是做变性的DNA电泳，如果得到的是两条带，就认为链长是不一样的。但是实际这么做了以后发现还是有问题。
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-07 01:31:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a770992409

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyl121 at 2014-01-05 21:04:42
楼主啊，你这个问题有点不太明了
1.poly A模板没有这个吧，在DNA中有AAAAA的序列的话，你可以配对的设计，但是必然会形成引物二聚体的
   同时，POLYA是后期加上去的，如果你是用CDNA，那你是去掉这个结构的
2.如 ...

1.没用cDNA，请问这样为什么会形成引物二聚体？
2.意思不是模板的链长不一样，而是类似于用PCR的方法给等长的双链模板加上粘性末端，这其中很重要的是同利用PCR的扩增效果得到很多这样的产物，可以理解为两步合并为一步吧
赞一下 回复此楼
7楼2014-01-07 01:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a770992409

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by m602010145 at 2014-01-06 13:24:26
这个问题太2

104除以2等于多少？这么2的问题你怎么回答不出来？
赞一下 回复此楼
8楼2014-01-07 01:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有几个问题：
1. “poly A的模板”是什么样的模板？

2. 如果参考文献的方法要得到的双链不一样长（类似于有粘性末端），具体什么意思，是通过PCR获得吗？还是其他方法？能否具体的举个例子？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2014-01-07 10:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyl121

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by a770992409 at 2014-01-07 01:36:18
1.没用cDNA，请问这样为什么会形成引物二聚体？
2.意思不是模板的链长不一样，而是类似于用PCR的方法给等长的双链模板加上粘性末端，这其中很重要的是同利用PCR的扩增效果得到很多这样的产物，可以理解为两步合并 ...

楼主，你好，大致懂你的意思了
首先，表示抱歉，不一定完全形成二聚体，但是有极大的可能性的，因为你是一连串的相同碱基，总之，会有很大的影响，可以参见引物设计要求
   其次，你要给双链加上若干粘性模板的状况，当然不等长，设计引物也可以，但就是不知道稳定性如何，效果如何（因为没有试过，不便评论）你可以先试试，效果不好的话，我的建议是你可以酶位点的那些碱基，到时把他们减掉就好，这样可以得到的你的两步了，记得你序列长度，看条带先大致判断，做下一步时就明了了，祝好吧
赞一下 回复此楼
不经一番寒彻骨，怎得梅花扑鼻香？为科学进步不懈努力
10楼2014-01-07 11:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a770992409 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭