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a770992409

新虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by gyl121 at 2014-01-07 11:12:15
楼主,你好,大致懂你的意思了
首先,表示抱歉,不一定完全形成二聚体,但是有极大的可能性的,因为你是一连串的相同碱基,总之,会有很大的影响,可以参见引物设计要求
   其次,你要给双链加上若干粘性模板的状 ...

谢谢!有人告诉我如果很多相同的AAA的这样的引物的话taq酶就会掉下来,之前我只知道引物设计的时候AGTC要均匀,不均匀的后果是什么不知道。真的会掉下来吗,如果会掉下来就能达到目的了。
11楼2014-01-07 11:28:47
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a770992409

新虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-07 10:31:30
有几个问题:
1. “poly A的模板”是什么样的模板?

2. 如果参考文献的方法要得到的双链不一样长(类似于有粘性末端),具体什么意思,是通过PCR获得吗?还是其他方法?能否具体的举个例子?

1.意思是AAAAAAAAAAAAAAAA……GT这样的模板,前面有很多AAA
2.意思不是模板的链长不一样,而是类似于用PCR的方法给等长的双链模板加上粘性末端,这其中很重要的是同时利用PCR的扩增效果得到很多这样的产物,可以理解为两步合并为一步吧
12楼2014-01-07 11:38:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-07 20:00:04
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6楼: Originally posted by a770992409 at 2014-01-07 01:31:27
1.你的意思是说如果模板是polyA,是可以被扩增出来的?我周围的人告诉我taq酶不能和AAA这样的序列结合,所以有此疑问
2.就先假定有方法可以得到,那么怎么证明得到了?我现在用的是做变性的DNA电泳,如果得到的是 ...

1. 你说的模板很特殊,我没有P过这样的模板。既然oligodT可以作为cDNA合成的模板,虽然用的是逆转录酶,我想DNA聚合酶应该也可以识别这样的模板。
2. 不知道非变性胶是一条带,变性胶上两条带能不能证明。
13楼2014-01-07 14:14:46
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a770992409

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 14:14:46
1. 你说的模板很特殊,我没有P过这样的模板。既然oligodT可以作为cDNA合成的模板,虽然用的是逆转录酶,我想DNA聚合酶应该也可以识别这样的模板。
2. 不知道非变性胶是一条带,变性胶上两条带能不能证明。...

1.你的看法很有用,谢谢!
2.我做非变性胶有其他条带,现在认为是引物二聚体,变性胶上用不同模板条带数目差异大有时4条,有时3条,不能确定。
14楼2014-01-07 14:59:18
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