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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的基础问题
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a770992409

新虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR的基础问题 已有4人参与

请教一下：1.PCR中引物是不是不能和poly A的模板结合？如果用的是taq 酶，poly A模板的AAAA……A会不会被切掉？
                  2.如果参考文献的方法要得到的双链不一样长（类似于有粘性末端），怎么证明我得到了这样双链产物？
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1楼 2014-01-05 15:18:43
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a770992409

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-07 10:31:30
有几个问题：
1. “poly A的模板”是什么样的模板？

2. 如果参考文献的方法要得到的双链不一样长（类似于有粘性末端），具体什么意思，是通过PCR获得吗？还是其他方法？能否具体的举个例子？

1.意思是AAAAAAAAAAAAAAAA……GT这样的模板，前面有很多AAA
2.意思不是模板的链长不一样，而是类似于用PCR的方法给等长的双链模板加上粘性末端，这其中很重要的是同时利用PCR的扩增效果得到很多这样的产物，可以理解为两步合并为一步吧
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12楼2014-01-07 11:38:02
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a770992409

新虫 (小有名气)
只有机器人回答我的帖子吗，好凄凉
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2楼2014-01-05 16:05:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-05 18:43:50
1. 如果你设计引物为oligoT，就可以与polyA模板结合了。没听说Taq酶有外切功能。
2. 好像没有听说可以得到不一样的长的双链。除非你只做一个循环。
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3楼2014-01-05 18:04:59
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gyl121

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-07 10:28:17
楼主啊，你这个问题有点不太明了
1.poly A模板没有这个吧，在DNA中有AAAAA的序列的话，你可以配对的设计，但是必然会形成引物二聚体的
   同时，POLYA是后期加上去的，如果你是用CDNA，那你是去掉这个结构的
2.如果双链不一样长，那个在DNA中也是看不到的，因为扩出来最多的是两引物的重复片段，所以不会出现，怎么样判定，我觉得你设计引物时将片段包括进去就可，酶切
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不经一番寒彻骨，怎得梅花扑鼻香？为科学进步不懈努力
4楼2014-01-05 21:04:42
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