应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的基础问题
52/1返回列表
查看: 1360  |  回复: 13
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

a770992409

新虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR的基础问题已有4人参与

请教一下：1.PCR中引物是不是不能和poly A的模板结合？如果用的是taq 酶，poly A模板的AAAA……A会不会被切掉？
                  2.如果参考文献的方法要得到的双链不一样长（类似于有粘性末端），怎么证明我得到了这样双链产物？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2014-01-05 15:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-07 20:00:04
引用回帖:
6楼: Originally posted by a770992409 at 2014-01-07 01:31:27
1.你的意思是说如果模板是polyA，是可以被扩增出来的？我周围的人告诉我taq酶不能和AAA这样的序列结合，所以有此疑问
2.就先假定有方法可以得到，那么怎么证明得到了？我现在用的是做变性的DNA电泳，如果得到的是 ...

1. 你说的模板很特殊，我没有P过这样的模板。既然oligodT可以作为cDNA合成的模板，虽然用的是逆转录酶，我想DNA聚合酶应该也可以识别这样的模板。
2. 不知道非变性胶是一条带，变性胶上两条带能不能证明。
赞一下 回复此楼
13楼2014-01-07 14:14:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

a770992409

新虫 (小有名气)
只有机器人回答我的帖子吗，好凄凉
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-05 16:05:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-05 18:43:50
1. 如果你设计引物为oligoT，就可以与polyA模板结合了。没听说Taq酶有外切功能。
2. 好像没有听说可以得到不一样的长的双链。除非你只做一个循环。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-05 18:04:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyl121

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-07 10:28:17
楼主啊，你这个问题有点不太明了
1.poly A模板没有这个吧，在DNA中有AAAAA的序列的话，你可以配对的设计，但是必然会形成引物二聚体的
   同时，POLYA是后期加上去的，如果你是用CDNA，那你是去掉这个结构的
2.如果双链不一样长，那个在DNA中也是看不到的，因为扩出来最多的是两引物的重复片段，所以不会出现，怎么样判定，我觉得你设计引物时将片段包括进去就可，酶切
赞一下 回复此楼
不经一番寒彻骨，怎得梅花扑鼻香？为科学进步不懈努力
4楼2014-01-05 21:04:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭