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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菜鸟求助多肽SDS电泳的问题。。。。。。。。
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樱梦

铁虫 (小有名气)

[求助] 菜鸟求助多肽SDS电泳的问题。。。。。。。。 已有1人参与

我不是专业做蛋白的，只是在蛋白上改性高分子。。。最近在做一个多肽上改性高分子的反应，多肽分子量为3400左右，改性后为2万左右，但在跑SDS电泳时遇到问题就是用考马斯蓝染色后再脱色条带颜色非常浅，以至于凝胶成像系统拍不出来效果。以前做牛血清白蛋白（分子量67000左右）改性时染色脱色效果非常好，条带很清晰，为什么换多肽就不行了呢？而且上样的量也增加了几倍（每孔加了40微克了）。这种问题怎么解决呢？求问各位做蛋白的大侠们，谢谢了！！！！！
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1楼 2013-12-30 17:11:26
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
樱梦: 金币+10, ★有帮助, 1 2013-12-30 17:19:39
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-31 08:37:16
你所指的该多肽在改性前后，经考玛斯亮蓝染色后是否都有条带，还是改性后没有，又或是都没有，如果改前有，那说明是多肽的问题，如果改前改后都没有，那说明是实验问题....
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生物化学与分子生物学
2楼2013-12-30 17:16:19
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樱梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:16:19
你所指的该多肽在改性前后，经考玛斯亮蓝染色后是否都有条带，还是改性后没有，又或是都没有，如果改前有，那说明是多肽的问题，如果改前改后都没有，那说明是实验问题....

多肽改性前后跑出的条带都很浅，用同样的条件跑BSA条带很好看的，不知道是不是染色的时候多肽扩散了呢？谢谢哈。。。
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3楼2013-12-30 17:19:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 樱梦 at 2013-12-30 17:19:21
多肽改性前后跑出的条带都很浅，用同样的条件跑BSA条带很好看的，不知道是不是染色的时候多肽扩散了呢？谢谢哈。。。...

多肽扩散不应该的啊！你在跑胶前多肽经过怎样的处理？
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生物化学与分子生物学
4楼2013-12-30 17:35:36
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樱梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:35:36
多肽扩散不应该的啊！你在跑胶前多肽经过怎样的处理？...

是买来的多肽直接跑的，是一种叫鲑鱼降钙素的多肽，还有一个是这种多肽接上聚合物的。。。请问配制样品的时候是直接和上样缓冲液液混合就可以了吗？是不是需要混合一定时间？多肽跑胶前要不要变性处理？
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5楼2013-12-30 20:09:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-31 08:37:20
知道考马斯亮蓝染色的原理是什么吧。小肽中这些效用氨基酸残基本身就比大蛋白少，加上聚合物后，聚合物不可能参与染色，只有原肽上的那些氨基酸残基在作用。还有可能可能是你的多肽里的赖氨酸、精氨酸残基本身就比较少。
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6楼2013-12-31 01:55:49
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 樱梦 at 2013-12-30 20:09:29
是买来的多肽直接跑的，是一种叫鲑鱼降钙素的多肽，还有一个是这种多肽接上聚合物的。。。请问配制样品的时候是直接和上样缓冲液液混合就可以了吗？是不是需要混合一定时间？多肽跑胶前要不要变性处理？...

混合后煮沸5min，变性处理，使之成为单链结构
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生物化学与分子生物学
7楼2013-12-31 12:09:06
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Allen206

银虫 (小有名气)
怎么改性的？结合的是什么聚合物？靠什么化学键结合的？你跑的什么胶啊？3.4k要用tricine吧？
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不想说什么，，，，
8楼2013-12-31 17:02:38
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三只金刚

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2018-10-10 10:14:00
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