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樱梦

铁虫 (小有名气)

[求助] 菜鸟求助多肽SDS电泳的问题。。。。。。。。 已有1人参与

我不是专业做蛋白的,只是在蛋白上改性高分子。。。最近在做一个多肽上改性高分子的反应,多肽分子量为3400左右,改性后为2万左右,但在跑SDS电泳时遇到问题就是用考马斯蓝染色后再脱色条带颜色非常浅,以至于凝胶成像系统拍不出来效果。以前做牛血清白蛋白(分子量67000左右)改性时染色脱色效果非常好,条带很清晰,为什么换多肽就不行了呢?而且上样的量也增加了几倍(每孔加了40微克了)。这种问题怎么解决呢?求问各位做蛋白的大侠们,谢谢了!!!!!
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
樱梦: 金币+10, 有帮助, 1 2013-12-30 17:19:39
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-31 08:37:16
你所指的该多肽在改性前后,经考玛斯亮蓝染色后是否都有条带,还是改性后没有,又或是都没有,如果改前有,那说明是多肽的问题,如果改前改后都没有,那说明是实验问题....
生物化学与分子生物学
2楼2013-12-30 17:16:19
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樱梦

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:16:19
你所指的该多肽在改性前后,经考玛斯亮蓝染色后是否都有条带,还是改性后没有,又或是都没有,如果改前有,那说明是多肽的问题,如果改前改后都没有,那说明是实验问题....

多肽改性前后跑出的条带都很浅,用同样的条件跑BSA条带很好看的,不知道是不是染色的时候多肽扩散了呢?谢谢哈。。。
3楼2013-12-30 17:19:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 樱梦 at 2013-12-30 17:19:21
多肽改性前后跑出的条带都很浅,用同样的条件跑BSA条带很好看的,不知道是不是染色的时候多肽扩散了呢?谢谢哈。。。...

多肽扩散不应该的啊!你在跑胶前多肽经过怎样的处理?
生物化学与分子生物学
4楼2013-12-30 17:35:36
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樱梦

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:35:36
多肽扩散不应该的啊!你在跑胶前多肽经过怎样的处理?...

是买来的多肽直接跑的,是一种叫鲑鱼降钙素的多肽,还有一个是这种多肽接上聚合物的。。。请问配制样品的时候是直接和上样缓冲液液混合就可以了吗?是不是需要混合一定时间?多肽跑胶前要不要变性处理?
5楼2013-12-30 20:09:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-31 08:37:20
知道考马斯亮蓝染色的原理是什么吧。小肽中这些效用氨基酸残基本身就比大蛋白少,加上聚合物后,聚合物不可能参与染色,只有原肽上的那些氨基酸残基在作用。还有可能可能是你的多肽里的赖氨酸、精氨酸残基本身就比较少。
6楼2013-12-31 01:55:49
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 樱梦 at 2013-12-30 20:09:29
是买来的多肽直接跑的,是一种叫鲑鱼降钙素的多肽,还有一个是这种多肽接上聚合物的。。。请问配制样品的时候是直接和上样缓冲液液混合就可以了吗?是不是需要混合一定时间?多肽跑胶前要不要变性处理?...

混合后煮沸5min,变性处理,使之成为单链结构
生物化学与分子生物学
7楼2013-12-31 12:09:06
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Allen206

银虫 (小有名气)

怎么改性的?结合的是什么聚合物?靠什么化学键结合的?你跑的什么胶啊?3.4k要用tricine吧?
不想说什么,,,,
8楼2013-12-31 17:02:38
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三只金刚

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

9楼2018-10-10 10:14:00
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