| 查看: 1692 | 回复: 1 | ||
[求助]
RT-PCR反应中模板DNA的问题 已有1人参与
|
| 我做RT-PCR，买的是Introvigen的试剂盒进行总RNA提取、逆转录成cDNA第一链、再PCR。以cDNA第一链作为模板进行PCR。今天有人指出，PCR是要用双链DNA为模板，而cDNA是单链，以单链为模板弄是错误的。而我看书上说RT-PCR是传统PCR的拓展，就是以cDNAA第一链作为模板的，合成第二链的过程实际已经包含在PCR过程中了，并且很多论文做RT-PCR的也是直接以cDNA第一链作为模板。请问下大家，我这样理解是不是对的？另外想到一个问题，以cDNA第一链作为模板进行PCR和以DNA双链为模板进行PCR，两种PCR试剂盒有没有区别，主要区别有哪些？谢谢大家了 |
回复此楼» 猜你喜欢
生物学308分求调剂（一志愿华东师大）
已经有3人回复
-
求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过
已经有3人回复
-
环境工程 085701，267求调剂
已经有14人回复
-
308求调剂
已经有12人回复
-
求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319
已经有21人回复
-
311求调剂
已经有8人回复
-
294分080500材料科学与工程求调剂
已经有13人回复
-
288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工
已经有19人回复
-
288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行
已经有23人回复
-
一志愿085600中科院宁波所276分求调剂
已经有17人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RT-PCR的标准曲线的构建相关
已经有3人回复
- 关于pcr的问题，没条带？？？？？？
已经有13人回复
- PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗？？
已经有21人回复
- RT-PCR实验操作过程中遇到的问题
已经有15人回复
- 可变剪切体RT-PCR检测的技术问题
已经有8人回复
- RT-PCR扩增目的基因片度大小是362bp，PCR的时候使用什么聚合酶好些呢？
已经有5人回复
- 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题！
已经有18人回复
- 请问，用基因组DNA和cDNA做模板进行PCR有什么区别呀？
已经有6人回复
- 有关RT-PCR模板RNA量的问题，请高手解答！！！
已经有16人回复
- PCR实验前，模板DNA浓度的确定
已经有6人回复
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- RT-qPCR实验问题
已经有23人回复
- rt-pcr 复孔之间的目的基因表达不均问题
已经有3人回复
- 一种比较详细的PCR技术
已经有10人回复
- RT-PCR逆转录加模板问题
已经有9人回复
- 关于菌液PCR的DNA模板制备，
已经有4人回复
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 关于定量pcr的体系，RT-pcr，Q-pcr
已经有3人回复
- 【求助/交流】PCR 聚合酶链反应是用来干嘛的
已经有20人回复
cicelyzh
主管区长
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飘雪3889: 金币+10, ★★★很有帮助, 我前些天已经明白了，不过还是要感谢您 2013-12-24 16:28:23
感谢参与，应助指数 +1
飘雪3889: 金币+10, ★★★很有帮助, 我前些天已经明白了，不过还是要感谢您 2013-12-24 16:28:23
| 以单链cDNA为模板做PCR没有问题，和双链DNA模板的区别是在反应第一个循环时，只有一条引物（与cDNA互补的那条）发生反应。第一个循环过后就生成了两条互补的DNA链，接下来的过程就是完全相同的了。做RT-PCR都是用单链cDNA直接P的。我不知道你说的PCR试剂盒是什么。反转率的试剂盒通常也只能合成第一条cDNA链，如果要获取双链cDNA，通常是把RNA模板消化掉后在进行PCR获得。通常用于PCR的盒子无外乎包括buffer, Mg2+, dNTP，酶，这些都是普通PCR反应所必需的，应该没有太大区别。如果要做荧光定量，还有荧光染料。 |
2楼2013-12-23 07:31:58
