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毕赤酵母表达实验设计 已有1人参与
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欲进行毕赤酵母表达一个真核蛋白，实验设计如下： 合成基因：两端采用EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点双酶切连接进入pPIC9K中。 提取pPIC9K-目的基因，SacⅠ线性化后电转化进入GS115，MD平板筛选。 将MD平板的菌落进行过夜培养，粗提取基因组，进行基因组PCR（5‘AOX/3’AOX）鉴定阳性菌落。 将鉴定的阳性克隆，挑取在BMGY培养基中过夜，收集菌体，转入BMMY中进行诱导表达，取不同时间点的上清和菌体进行SDS-PAGE，查看是否能够诱导表达成功。 不知道这个大概思路怎么样？按照这个大致步骤做下来不知道可不可行？ |
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