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柠檬可乐星新虫 (小有名气)
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[求助]
转化之后复苏感受态细胞能用加了氨苄的LB培养基吗？ 已有3人参与
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我看师姐做的是把连接产物转化到感受态细胞之后，加入800ul 不加氨苄的LB培养基，然后37℃摇菌1h。 我想问的是这一步为什么不能用加了氨苄的LB培养基呢？这样不是还可以防止杂菌的生长吗？ 第一次做克隆，有些步骤的原理还不是很清楚。求高手指点！ |
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gyesang
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柠檬可乐星
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lihe131
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-13 14:44:05
柠檬可乐星: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-13 15:12:24
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是不应该加的。 热激就是让菌体瞬间热胀，表面蛋白掉下来形成通道，质粒才能进去，这个过程对细菌是有伤害的。菌体42度热激之后很脆弱。另外热激时会死一部分细菌，死掉的细菌会裂解，释放出一些蛋白酶什么的，对活着的细菌也不太好。用不加抗生素的LB37度温浴是为了让还活着的细菌更好的复苏。如果加了抗生素会增加细菌复苏时的负担。但是温浴的时间也不宜过长，一般以半个小时到一个小时之间为宜。 |
4楼2013-12-13 11:44:45
