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dingcong1216

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么PCR跑出来是这样的 已有9人参与

麻烦各位大侠帮忙看看,最近PCR跑出来的图为什么会是这样?跑了几次都是这样,每次都是新换过的缓冲液,电泳槽也都洗过。
两个图都是1.5%的胶,第一个图是90v,50min,第二个图是100v,1个小时
为什么PCR跑出来是这样的
20131212dcc.jpg


为什么PCR跑出来是这样的-1
20131206dcc.jpg
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smile溪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-12 18:00:11
amisking: 回帖置顶 2013-12-12 18:00:13
dingcong1216: 金币+1, 有帮助 2013-12-13 09:51:11
你好,首先你要确定自己的marker是不是跑出来了,我看到有带出现证明胶块和电泳液是没有问题的,我原来出现过这种情况,是电压不稳的问题,带呈现弥散状,是你的电压没有达到你的预期值。更换电泳仪试试。
3楼2013-12-12 17:10:20
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hermain

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216: 金币+1, 有帮助 2013-12-13 09:31:35
dingcong1216: 金币+1, 有帮助 2013-12-13 09:51:52
你的marker用的是什么啊?最亮的那条是多大啊?你PCR目标产物大小是多少啊?假定最亮的一条是1kb的话,那么第一张图上排从左往右marker后的三个孔中的应该是PCR加入的引物。这样的话应该不是电泳的问题而是PCR的问题,应该再调整一下退火温度,或者做个阳性对照。
6楼2013-12-12 21:40:17
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普通回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

用的什么缓冲液, 两边是marker吗? 都是大的啊?跑的是什么样的核酸?p出来的还是提出来的?楼主多给点信息啊。
2楼2013-12-12 16:43:04
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216: 金币+1 2013-12-13 09:52:08
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-12-13 14:47:23
你看看你是跑时间太久了,我们实验室的人一般采用110V,30min内,可是你的Marker跑的也不是很好呢,你试试换个电泳条件。此外,你看看你的Marker适不适合你的样品。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

轻描淡写,浓墨重彩。
4楼2013-12-12 19:40:24
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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dingcong1216: 金币+1, 有帮助 2013-12-13 09:27:30
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-13 14:47:32
你两侧的marker跑的还可以说明 agarose gel 和 缓冲液没有问题,所以就是你PCR的原因。原因很多的,重新摸索PCR条件吧。好运!
Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
5楼2013-12-12 20:25:20
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dingcong1216

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2013-12-12 16:43:04
用的什么缓冲液, 两边是marker吗? 都是大的啊?跑的是什么样的核酸?p出来的还是提出来的?楼主多给点信息啊。

用的TAE缓冲液,两边的marker 是takara的DL 2000,跑的是PCR产物
7楼2013-12-13 09:25:20
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dingcong1216

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-12-12 19:40:24
你看看你是跑时间太久了,我们实验室的人一般采用110V,30min内,可是你的Marker跑的也不是很好呢,你试试换个电泳条件。此外,你看看你的Marker适不适合你的样品。

嗯,我用的marker是takara的DL2000,我下次换个电泳条件看看,谢谢了
8楼2013-12-13 09:27:13
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dingcong1216

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by smile溪 at 2013-12-12 17:10:20
你好,首先你要确定自己的marker是不是跑出来了,我看到有带出现证明胶块和电泳液是没有问题的,我原来出现过这种情况,是电压不稳的问题,带呈现弥散状,是你的电压没有达到你的预期值。更换电泳仪试试。

嗯,好的,我们实验室没有电泳仪,都是在别的实验室跑的
9楼2013-12-13 09:28:59
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dingcong1216

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mjt2007 at 2013-12-12 20:25:20
你两侧的marker跑的还可以说明 agarose gel 和 缓冲液没有问题,所以就是你PCR的原因。原因很多的,重新摸索PCR条件吧。好运!

嗯好的,谢谢,在摸索中
10楼2013-12-13 09:31:18
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