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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

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琼脂糖凝胶凝的好不好,电压不要太高,电泳不要太长
但愿人长久
11楼2013-12-13 09:32:39
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dingcong1216

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hermain at 2013-12-12 21:40:17
你的marker用的是什么啊?最亮的那条是多大啊?你PCR目标产物大小是多少啊?假定最亮的一条是1kb的话,那么第一张图上排从左往右marker后的三个孔中的应该是PCR加入的引物。这样的话应该不是电泳的问题而是PCR的问题 ...

marker是takara的DL2000,最亮的那条是750,第一个图前6个目标产物是300左右,后3个是270多bp,中间是470多bp。前3个应该是引物二聚体,退火温度是3个梯度的,53,55,57,会再调整一下退火温度,可是marker也跑的不怎么好啊,是怎么回事
12楼2013-12-13 09:44:43
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dingcong1216 at 2013-12-13 09:25:20
用的TAE缓冲液,两边的marker 是takara的DL 2000,跑的是PCR产物...

胶浓度是不是大了点。
13楼2013-12-13 10:19:43
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zyf20080825

新虫 (初入文坛)

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★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-13 14:47:47
一般95V,20-30min就行。在确保PCR没有问题的情况下,你的Marker都没跑好,应该是电泳时出了问题。我看你图中的胶好像是上下好几块,我建议你制单独的一块胶,单独跑看看。我以前出现过制上下都能点样的大胶,结果上面的没问题,下面的胶就出现弥散。还有就是把胶放在别人胶的后面跑,结果效果都很差。
14楼2013-12-13 10:38:56
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zzl2516

金虫 (小有名气)

如果电压没问题 可以考虑换个buffer
15楼2013-12-13 13:00:14
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hermain

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-13 14:48:04
引用回帖:
12楼: Originally posted by dingcong1216 at 2013-12-13 09:44:43
marker是takara的DL2000,最亮的那条是750,第一个图前6个目标产物是300左右,后3个是270多bp,中间是470多bp。前3个应该是引物二聚体,退火温度是3个梯度的,53,55,57,会再调整一下退火温度,可是marker也跑的不怎么 ...

marker的1000和750没有分开,你说用的是1.5的胶,我觉得有点大了。可以试着用1.2或1.0的胶。100V跑1h,用紫外灯看一下,如果还没分开的话,就再跑10min。还有,制胶的时候梳子一定要洗干净。
16楼2013-12-13 13:51:00
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hermain

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-13 14:47:58
marker的1000和750没有分开,你说用的是1.5的胶,我觉得有点大了。可以试着用1.2或1.0的胶。100V跑1h,用紫外灯看一下,如果还没分开的话,就再跑10min。还有,制胶的时候梳子一定要洗干净。
17楼2013-12-13 14:24:39
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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关于跑胶可以参看这个帖子4楼解答:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6669314&fpage=1
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
18楼2013-12-13 14:51:03
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昙花巫婆

银虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:07:46
你跑的时间太长了,通常小片段的带,跑十分钟就可以看了,大片段的带跑20分钟可以看了,跑的时间长了,就弥散了,就会出现你这种情况
我是女博士,但我并不可怕!
19楼2013-12-13 21:46:38
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zijinok

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:07:52
你的Marker跑出来就怪怪的,感觉是配胶的问题,Agarose没有溶解充分,还以透明的颗粒状存在,就会导致跑的条带弯弯曲曲,且呈现弥散状。
建议你配胶的时候,加热一会就充分混匀,最好在灯光下看到没有透明颗粒了再配胶。
20楼2013-12-28 15:06:13
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