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dingcong1216

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么PCR跑出来是这样的 已有9人参与

麻烦各位大侠帮忙看看,最近PCR跑出来的图为什么会是这样?跑了几次都是这样,每次都是新换过的缓冲液,电泳槽也都洗过。
两个图都是1.5%的胶,第一个图是90v,50min,第二个图是100v,1个小时
为什么PCR跑出来是这样的
20131212dcc.jpg


为什么PCR跑出来是这样的-1
20131206dcc.jpg
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hermain

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-13 14:48:04
引用回帖:
12楼: Originally posted by dingcong1216 at 2013-12-13 09:44:43
marker是takara的DL2000,最亮的那条是750,第一个图前6个目标产物是300左右,后3个是270多bp,中间是470多bp。前3个应该是引物二聚体,退火温度是3个梯度的,53,55,57,会再调整一下退火温度,可是marker也跑的不怎么 ...

marker的1000和750没有分开,你说用的是1.5的胶,我觉得有点大了。可以试着用1.2或1.0的胶。100V跑1h,用紫外灯看一下,如果还没分开的话,就再跑10min。还有,制胶的时候梳子一定要洗干净。
16楼2013-12-13 13:51:00
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查看全部 20 个回答

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

用的什么缓冲液, 两边是marker吗? 都是大的啊?跑的是什么样的核酸?p出来的还是提出来的?楼主多给点信息啊。
2楼2013-12-12 16:43:04
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smile溪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-12 18:00:11
amisking: 回帖置顶 2013-12-12 18:00:13
dingcong1216: 金币+1, 有帮助 2013-12-13 09:51:11
你好,首先你要确定自己的marker是不是跑出来了,我看到有带出现证明胶块和电泳液是没有问题的,我原来出现过这种情况,是电压不稳的问题,带呈现弥散状,是你的电压没有达到你的预期值。更换电泳仪试试。
3楼2013-12-12 17:10:20
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216: 金币+1 2013-12-13 09:52:08
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-12-13 14:47:23
你看看你是跑时间太久了,我们实验室的人一般采用110V,30min内,可是你的Marker跑的也不是很好呢,你试试换个电泳条件。此外,你看看你的Marker适不适合你的样品。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

轻描淡写,浓墨重彩。
4楼2013-12-12 19:40:24
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