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574759350

铁虫 (小有名气)

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[求助] 低温诱导蛋白表达时用多少度合适？已有1人参与

在做低温诱导蛋白表达时，大家一般用什么温度做诱导，诱导多长时间，所用IPTG浓度是多少？

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1楼 2013-12-04 09:55:45

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clcl88

银虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-04 18:21:00

引用回帖:

6楼: Originally posted by 574759350 at 2013-12-04 13:37:12
我也是pet28b载体转化的BL21，刚开始用37℃，基本都是包涵体形式，你这样做的效果怎么样？...

我们做如果37℃只诱导3-4个小时。形成包涵体的话，有很多因素，下面是我摘抄的他人的一段，仅供参考。
重组蛋白质形成包涵体的机理：1.重组蛋白质的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠的辅助因子，而无法形成正确的次级键。2.外源基因合成太快，没有足够的时间进行折叠、二硫键的正确配对，同时可能有太多的蛋白质间的非特异性结合、蛋白质局部浓度高于溶解度。3.重组蛋白质的一级结构也与包涵体的形成有关，一般说含硫氨基酸氨基酸多的蛋白质可能易于形成包涵体，含脯氨酸多的蛋白质则明显的与形成包涵体的概率呈正相关，可能是因为脯氨酸破坏螺旋结构，而螺旋结构多位于蛋白质分子表面，有相对较强的机械强度，能够抑制蛋白质分子之间的彼此靠近和相互作用。4.重组蛋白质所处的环境可能不适宜蛋白质形成天然构象，发酵温度较高和pH接近重组蛋白质的等电点时比较容易形成包涵体。
综上述，重组蛋白质形成包涵体不一定需要绝对的巨大的表达量。