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魔音涟漪

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助哪位用琼脂糖电泳跑过蛋白的高手 已有2人参与

求助大神,我的样品分子量最大有1000KDa,所以想用琼脂糖凝胶电泳跑一下,不需要特别精确的,我只是要看一下他们变化的趋势,但是第一次尝试用的1%的琼脂糖凝胶,没有加EB,样品未处理,跑出来我是用考马斯亮蓝染色然后脱色的,但是什么也没有,是不是因为没有处理样品,还是电泳缓冲液需要换一下?求大神指导
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魔音涟漪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davidzjy at 2013-12-03 11:38:35
有没有用表面活性剂?不用活性剂肯定跑不出来
1 蛋白质的二级结构没有被破坏 三维形态会影响摩擦力
2 不同蛋白的pI不同 在胶中前进的速率不一样

PAGE中加入的表面活性剂(SDS等)会以固定比例结合在肽键上  ...

那我试一试在样品中加入SDS吗?那电泳缓冲液也需要换成PAGE的吗
3楼2013-12-03 13:14:59
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-03 12:31:20
有没有用表面活性剂?不用活性剂肯定跑不出来
1 蛋白质的二级结构没有被破坏 三维形态会影响摩擦力
2 不同蛋白的pI不同 在胶中前进的速率不一样

PAGE中加入的表面活性剂(SDS等)会以固定比例结合在肽键上 破坏原有的扭曲 使肽链成为一条长链
并且 因为每个肽键结合固定数量的带电分子 因此 肽链的带电量和其长度基本成正比(肽链越长 肽键越多)
从而使得它们在胶中的行进速率成比例
2楼2013-12-03 11:38:35
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得还是安安心心的跑PAGE才是正道
实在不行就去找一些琼脂糖跑蛋白的protocol
4楼2013-12-03 13:22:22
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魔音涟漪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Davidzjy at 2013-12-03 13:22:22
我觉得还是安安心心的跑PAGE才是正道
实在不行就去找一些琼脂糖跑蛋白的protocol

我的样品之前跑过page了,但是他是1000KDa,PAGE不是最大也就二三百吗?
5楼2013-12-03 14:14:34
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