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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助哪位用琼脂糖电泳跑过蛋白的高手
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魔音涟漪

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助哪位用琼脂糖电泳跑过蛋白的高手已有2人参与

求助大神，我的样品分子量最大有1000KDa,所以想用琼脂糖凝胶电泳跑一下，不需要特别精确的，我只是要看一下他们变化的趋势，但是第一次尝试用的1%的琼脂糖凝胶，没有加EB，样品未处理，跑出来我是用考马斯亮蓝染色然后脱色的，但是什么也没有，是不是因为没有处理样品，还是电泳缓冲液需要换一下？求大神指导
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1楼2013-12-03 10:18:16
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魔音涟漪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Davidzjy at 2013-12-03 11:38:35
有没有用表面活性剂？不用活性剂肯定跑不出来
1 蛋白质的二级结构没有被破坏 三维形态会影响摩擦力
2 不同蛋白的pI不同 在胶中前进的速率不一样

PAGE中加入的表面活性剂（SDS等）会以固定比例结合在肽键上  ...

那我试一试在样品中加入SDS吗?那电泳缓冲液也需要换成PAGE的吗
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3楼2013-12-03 13:14:59
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魔音涟漪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Davidzjy at 2013-12-03 13:22:22
我觉得还是安安心心的跑PAGE才是正道
实在不行就去找一些琼脂糖跑蛋白的protocol

我的样品之前跑过page了，但是他是1000KDa，PAGE不是最大也就二三百吗？
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5楼2013-12-03 14:14:34
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