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草鹿八千留银虫 (初入文坛)
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关于WB转膜的问题 已有1人参与
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小女最近在做western blot，刚开始做，很多东西还不懂。 遇到一个很奇怪的问题，GST蛋白pulldown实验，被拉的蛋白是his标签，然后用anti-his的一抗来做western实验。两个蛋白均是体外纯化的，是因为怕拉到的蛋白量少，用考马斯亮蓝染色条带太弱，所以才想采用western来放大一下信号。 但是我在做western的同时也跑了一块胶来做考马斯亮蓝染色，发现可以看到很弱的条带。可是western做了两遍还是看不到理论该有的条带，后来把膜用丽春红染色，发现能看到很明显的GST蛋白（35kd）的条带，可是却看不到被拉的蛋白（16kd）的条带。 确定一抗和二抗都没有问题。苦思不得其解，哪位western高手能够帮我解答一下，不胜感激！！ |
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