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lipingzhou银虫 (初入文坛)
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[求助]
WB问题请教，请高手指点
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本人最近一直在做WB，只有内参β-actin有结果，其他蛋白均没有结果，像各位高手求助啊，我将实验信息写在下面，请诸位大神指点一二： 1.我的蛋白分子量分别是93,43,11； 2.我转膜的条件是半干法0.04mA，一个小时； 3.转膜后丽春红染色有许多条带； 4.5%脱脂奶粉封闭2h； 5.我的一抗是abcam的，用5%封闭液稀释（1:1000；1:2000按抗体说明书操作）； 6.TBST洗膜10min*3； 7.二抗也是abcam的，1:5000； 8.加ECL后暗室中看不到荧光（内参也看不到荧光但内参显影定影后有较好的条带）； 9.曝光20s，以前曝光1min是背景全黑了，内参压片20s后条带较好了，但是别的蛋白压片从20s到1min都没有条带，前几次显影定影都会有背景（尽管没有条带），但最近一次连背景都没有了，一片透明，会是什么原因呢？？？ 每一张PVDF膜转膜后我都会丽春红染色，发现都有条带的，就是加ECL后暗室里看不到荧光，急死了，都一个月了还做不出来，给位帮帮忙啊，万分感谢！！！ |
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