| 查看: 2510 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
lipingzhou银虫 (初入文坛)
|
[求助]
WB问题请教，请高手指点
|
|
|
本人最近一直在做WB，只有内参β-actin有结果，其他蛋白均没有结果，像各位高手求助啊，我将实验信息写在下面，请诸位大神指点一二： 1.我的蛋白分子量分别是93,43,11； 2.我转膜的条件是半干法0.04mA，一个小时； 3.转膜后丽春红染色有许多条带； 4.5%脱脂奶粉封闭2h； 5.我的一抗是abcam的，用5%封闭液稀释（1:1000；1:2000按抗体说明书操作）； 6.TBST洗膜10min*3； 7.二抗也是abcam的，1:5000； 8.加ECL后暗室中看不到荧光（内参也看不到荧光但内参显影定影后有较好的条带）； 9.曝光20s，以前曝光1min是背景全黑了，内参压片20s后条带较好了，但是别的蛋白压片从20s到1min都没有条带，前几次显影定影都会有背景（尽管没有条带），但最近一次连背景都没有了，一片透明，会是什么原因呢？？？ 每一张PVDF膜转膜后我都会丽春红染色，发现都有条带的，就是加ECL后暗室里看不到荧光，急死了，都一个月了还做不出来，给位帮帮忙啊，万分感谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
申请科研项目纯靠实力能成功吗？
已经有8人回复
-
中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理
已经有4人回复
-
40+中年人失业后，还能找到好工作吗？
已经有3人回复
-
二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores
已经有4人回复
-
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有13人回复
-
极限拉扯，如何抉择
已经有14人回复
-
课题组会帮你通过考核么？
已经有7人回复
-
入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 磷酸二氢钾与磷酸二氢钠缓冲溶液的PH值问题，请专业高手指点
已经有4人回复
- 用SPSS运行IC50的一些问题请教，请高手指点
已经有8人回复
- 请求高手指点 语法问题
已经有13人回复
- 请高手指点：环境考研，数二考哪些章节呢？
已经有5人回复
- 想自己设计硬件电路并实现，想从零学起，请教高手指点，这方面最好最全的书是什么？
已经有10人回复
- 请高手指点一下怎么确定一个符号矩阵中的等值元素
已经有6人回复
- 核磁图的裂分不知道怎么解释，向大家请教，望高手指点
已经有25人回复
- 加溶剂后计算，不收敛，请高手指点
已经有5人回复
- 请高手指点：误把存放菌种的海尔冰箱调到在强制冷半个月后，菌种会全部死掉吗？
已经有21人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- 【求助】请CAD高手指点----关于CAD设置问题
已经有4人回复
- 数字图像处理 ，图像提取问题，和识别问题 请高手指点一下
已经有19人回复
- WB结果不理想，呼唤帮助
已经有20人回复
- 【求助/交流】pMD-18T载体连接出现了问题，请各位高手指点！！！
已经有17人回复
- 【求助】请高手指点diamond画图里的断键（broken off bond）设置
已经有9人回复
- 【求助】endnot编辑参考文献的问题，请高手们指点下
已经有2人回复
- 笔试排名很差，关于面试，请高手指点！
已经有15人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
lipingzhou
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 460
- 帖子: 15
- 在线: 16.5小时
- 虫号: 1175334
- 注册: 2010-12-22
- 专业: 细胞移植、组织再生与生物
5楼2013-06-26 14:56:11
晴天1882
木虫 (正式写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 4077.5
- 散金: 18
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 647
- 在线: 424.3小时
- 虫号: 744363
- 注册: 2009-04-09
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2013-06-26 11:42:38
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
3楼2013-06-26 14:22:59
4楼2013-06-26 14:33:54
200
