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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-27 09:08:37
引用回帖:
6楼: Originally posted by lipingzhou at 2013-06-26 14:57:53
谢谢，意思是内参压片的时间不能作为其他蛋白压片时间的一个参照对吧？...

各种抗体的效价不完全一样，蛋白的丰度也不同，每种抗体都有自己的最佳时间，需要实验摸索。
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11楼2013-06-26 23:54:24
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lipingzhou

银虫 (初入文坛)
谢谢各位，我现在发现是荧光几秒钟的消失了，我用直接在膜上滴了二抗后发现就几秒有荧光，我试过加ECL后直接压片，背景很深，条带很淡，几乎看不到啊。。。现在知道是荧光猝灭这个过程我该怎么办啊？？？
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12楼2013-06-28 11:52:59
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lipingzhou

银虫 (初入文坛)
谢谢各位，我现在发现加ECL后荧光几秒钟就消失了，我直接在膜上滴了二抗后加ECL发现就几秒有荧光，刚开始荧光挺强，然后闪了几秒就消失了。对于已经转膜后的膜我试了加ECL后迅速直接压片，看到背景很深，条带很淡，几乎看不到目的条带啊。。。多压几次片后发现后面的胶片几乎背景都没有了，又要白板了，现在知道是荧光猝灭这个过程我该怎么办啊？？？
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13楼2013-06-28 12:00:34
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-04 08:48:57
春红染色可以省略，
封闭液有的抗体需要BSA才工作，用牛奶则不行,通常一抗牛奶封闭液牛奶用3％的，BSA 用５％
最好能够有阳性对照样品，检测你的抗体没有问题，
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
14楼2013-07-04 01:31:25
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pengy0221

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lipingzhou at 2013-06-28 12:00:34
谢谢各位，我现在发现加ECL后荧光几秒钟就消失了，我直接在膜上滴了二抗后加ECL发现就几秒有荧光，刚开始荧光挺强，然后闪了几秒就消失了。对于已经转膜后的膜我试了加ECL后迅速直接压片，看到背景很深，条带很淡， ...

楼主问题解决了没？今天晚上做WB，出现了和你一样的问题，求解救
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15楼2013-11-04 21:33:13
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