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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-06-27 09:08:37
引用回帖:
6楼: Originally posted by lipingzhou at 2013-06-26 14:57:53
谢谢,意思是内参压片的时间不能作为其他蛋白压片时间的一个参照对吧?...

各种抗体的效价不完全一样,蛋白的丰度也不同,每种抗体都有自己的最佳时间,需要实验摸索。
11楼2013-06-26 23:54:24
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lipingzhou

银虫 (初入文坛)

谢谢各位,我现在发现是荧光几秒钟的消失了,我用直接在膜上滴了二抗后发现就几秒有荧光,我试过加ECL后直接压片,背景很深,条带很淡,几乎看不到啊。。。现在知道是荧光猝灭这个过程我该怎么办啊???
12楼2013-06-28 11:52:59
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lipingzhou

银虫 (初入文坛)

谢谢各位,我现在发现加ECL后荧光几秒钟就消失了,我直接在膜上滴了二抗后加ECL发现就几秒有荧光,刚开始荧光挺强,然后闪了几秒就消失了。对于已经转膜后的膜我试了加ECL后迅速直接压片,看到背景很深,条带很淡,几乎看不到目的条带啊。。。多压几次片后发现后面的胶片几乎背景都没有了,又要白板了,现在知道是荧光猝灭这个过程我该怎么办啊???
13楼2013-06-28 12:00:34
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-04 08:48:57
春红染色可以省略,
封闭液有的抗体需要BSA才工作,用牛奶则不行,通常一抗牛奶封闭液牛奶用3%的,BSA 用5%
最好能够有阳性对照样品,检测你的抗体没有问题,
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
14楼2013-07-04 01:31:25
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pengy0221

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by lipingzhou at 2013-06-28 12:00:34
谢谢各位,我现在发现加ECL后荧光几秒钟就消失了,我直接在膜上滴了二抗后加ECL发现就几秒有荧光,刚开始荧光挺强,然后闪了几秒就消失了。对于已经转膜后的膜我试了加ECL后迅速直接压片,看到背景很深,条带很淡, ...

楼主问题解决了没?今天晚上做WB,出现了和你一样的问题,求解救
15楼2013-11-04 21:33:13
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