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迷茫迷茫迷茫啊！！！His标签蛋白的固载
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求大侠们帮忙： 最近在表达一个蛋白，带了His的tag 纯化的时候，使用了Ni-NTA材料，使用500mM咪唑进行洗脱 后面的实验想要把蛋白质共价键和在材料上面，担心咪唑有干扰，想除去咪唑 试验了超滤的方法，蛋白质会沉淀 然后试了透析的方法，使用的是20mM的HEPES-HCL溶液，经过一夜的透析之后，蛋白质几乎完全沉淀了，为了弥补这个实验，就是用100mM TEAB，8M 尿素溶液溶解蛋白，然后加入7倍体积的HEPES溶液稀释之后，使用CNBr-agarose进行固载 固载之后，取上清液和固载钱的蛋白溶液进行浓度测定，固载前后的蛋白浓度是0.85和0.15，说明大部分的蛋白质都被固载在琼脂糖上面了 但是，奇怪的现象出现了，在经过了洗涤之后，把琼脂糖溶解在很少量的HEPES溶液里面，然后取一些琼脂糖加入到考马斯亮蓝溶液里面，溶液的颜色非常浅，说明蛋白质固载的量很少？？？ 我的蛋白质到底到哪里去了呢？ 非常感谢！ [ Last edited by 王琦2013 on 2013-11-28 at 16:46 ] |
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