| 查看: 377 | 回复: 0 | |||
[交流]
迷茫迷茫迷茫啊！！！His标签蛋白的固载
|
|
求大侠们帮忙： 最近在表达一个蛋白，带了His的tag 纯化的时候，使用了Ni-NTA材料，使用500mM咪唑进行洗脱 后面的实验想要把蛋白质共价键和在材料上面，担心咪唑有干扰，想除去咪唑 试验了超滤的方法，蛋白质会沉淀 然后试了透析的方法，使用的是20mM的HEPES-HCL溶液，经过一夜的透析之后，蛋白质几乎完全沉淀了，为了弥补这个实验，就是用100mM TEAB，8M 尿素溶液溶解蛋白，然后加入7倍体积的HEPES溶液稀释之后，使用CNBr-agarose进行固载 固载之后，取上清液和固载钱的蛋白溶液进行浓度测定，固载前后的蛋白浓度是0.85和0.15，说明大部分的蛋白质都被固载在琼脂糖上面了 但是，奇怪的现象出现了，在经过了洗涤之后，把琼脂糖溶解在很少量的HEPES溶液里面，然后取一些琼脂糖加入到考马斯亮蓝溶液里面，溶液的颜色非常浅，说明蛋白质固载的量很少？？？ 我的蛋白质到底到哪里去了呢？ 非常感谢！ [ Last edited by 王琦2013 on 2013-11-28 at 16:46 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
什么是人一生最重要的？
已经有6人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有11人回复
-
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有9人回复
-
【博士招生】太原理工大学2026化工博士
已经有5人回复
-
280求调剂
已经有3人回复
-
面上可以超过30页吧？
已经有11人回复
-
版面费该交吗
已经有15人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有18人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
求钙调蛋白CLM3用HIS标签的纯化protocol
已经有6人回复
- 带HIS-tag标签蛋白过NI-NDA挂不上柱子
已经有5人回复
- HIS标签的蛋白不挂柱，求助
已经有6人回复
- 关于pET32a的HIS标签
已经有10人回复
- 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到我的蛋白上去？
已经有13人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 蛋白纯化标签有哪些?
已经有6人回复
- His标签的蛋白纯化柱子
已经有10人回复
- 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题
已经有20人回复
- 镍柱纯化带his标签的蛋白，柱堵了
已经有6人回复
- 带GST标签的融合蛋白的纯化问题——急急急
已经有4人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- 过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事
已经有17人回复
- 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
已经有8人回复
- 想给自己的蛋白加个HIS标签？方法。。。。
已经有8人回复
- 使用NOVAGEN的His-tag蛋白纯化柱出现的问题
已经有3人回复
- 目的蛋白加myc或his标签？
已经有10人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- PET-28a C末端his标签
已经有9人回复
- 【求助/交流】His标签
已经有7人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人