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cisong

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 619.9
帖子: 151
在线: 53.6小时
虫号: 817005

[交流] 部分蛋白不能进入非变性聚丙烯酰胺胶体内

做细菌未知功能蛋白的胶内分离纯化，估计此蛋白是细胞膜外面疏松结合蛋白，菌体破碎是用高压破碎仪，压力在12000psi，破碎5次，破碎后添加1%的LDAO增加蛋白溶解度，然后超滤浓缩，再跑胶分离纯化。非变性胶，4%的堆积胶，pH6.8；8%的分离胶，pH8.8。110V，20分钟，然后220V，3h，但是考马斯亮蓝然后发现部分蛋白没有进入非变性聚丙烯酰胺胶体内，在上样槽底部，而这部分蛋白正是自己要的蛋白。特发帖求大侠分析下，采取什么措施能增大蛋白进入胶体的可能性。谢谢！

部分蛋白不能进入非变性聚丙烯酰胺胶体内

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1楼2013-11-22 10:32:29

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丫头7976

铜虫 (正式写手)

BioEPI: 1
应助: 8 (幼儿园)
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帖子: 799
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虫号: 765213

★
cisong(金币+1): 谢谢参与

我也遇到过这种情况，你的上样buffer里含有G250吗，或者降低盐浓度试试。在同样的条件下把marker跑一下，看看是样品的问题还是胶的问题，还有，你的胶是买的还是自己灌制的？

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

21楼2014-03-16 20:08:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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