24小时热门版块排行榜    

查看: 1313  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhangyep121

铜虫 (小有名气)

[求助] 求教一个关于荧光定量PCR的问题

各位,在这里向大家请教关于PCR的问题,就是我要扩增一个1400bp的片段,用常规PCR扩增后,跑胶可以看到目的条带,可是用同样条件上荧光定量PCR的机器就看不到实时扩增曲线,请问大家是什么原因造成的呢,请大家各抒己见,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junziwood

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人猜测或许是机器完成不了1.4kb的扩增吧,毕竟是qPCR。建议用RT-PCR。
4楼2013-11-21 13:44:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangyep121: 金币+5, 有帮助, 首先谢谢您的回答 2013-11-21 13:04:22
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-21 13:36:43
用Q-PCR跑1.4K的片段?我建议你温习一下Q-PCR基础理论知识
另外,以后不要用常规PCR去指导Q-PCR
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-11-21 11:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyep121

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-11-21 11:25:31
用Q-PCR跑1.4K的片段?我建议你温习一下Q-PCR基础理论知识
另外,以后不要用常规PCR去指导Q-PCR

我当然知道荧光定量PCR适合200bp以内的扩增,但是我希望能了解造成上述现象的原因,机理性的东西,设置1000多bpQPCR扩增也是有特殊原因的,希望得到深入的见解。
3楼2013-11-21 13:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangyep121: 金币+10, ★★★很有帮助, 您的回答很有启发性,谢谢 2013-11-21 15:13:37
一般来说qPCR的扩增子要小于200bp
主要还是考虑到扩增效率和二级结构的问题
大部分的qPCR设备只提供30-60s的延长时间
另外 大片段的单链DNA在annealing的时候 可能出现分子内配对而导致出现二级结构 从而使得扩增失败
当然 也有些特别设计的试剂盒可以对超过200bp的序列进行qPCR
5楼2013-11-21 13:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:42 by peike
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见