24小时热门版块排行榜

铜虫 (小有名气)

[求助] 求教一个关于荧光定量PCR的问题

各位，在这里向大家请教关于PCR的问题，就是我要扩增一个1400bp的片段，用常规PCR扩增后，跑胶可以看到目的条带，可是用同样条件上荧光定量PCR的机器就看不到实时扩增曲线，请问大家是什么原因造成的呢，请大家各抒己见，谢谢！

1楼 2013-11-21 10:15:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangyep121: 金币+10, ★★★很有帮助, 您的回答很有启发性，谢谢 2013-11-21 15:13:37

一般来说qPCR的扩增子要小于200bp
主要还是考虑到扩增效率和二级结构的问题
大部分的qPCR设备只提供30-60s的延长时间
另外大片段的单链DNA在annealing的时候可能出现分子内配对而导致出现二级结构从而使得扩增失败
当然也有些特别设计的试剂盒可以对超过200bp的序列进行qPCR

5楼2013-11-21 13:50:28

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 zhangyep121 的主题更新