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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE上样量和条带深浅
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幸福小草

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE上样量和条带深浅

请教下SDS-PAGE上样量一样为何条带会有深浅（提取蛋白的溶液组分不一样，尿素提取得到的蛋白质电泳上浅，sds提取的颜色深）
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1楼 2013-11-12 21:31:42
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
这个很正常啊，你的是膜蛋白吧？？？
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-11-12 22:52:37
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cloudrosy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
尿素和 SDS 对同一种定量方法的干扰程度也可能是原因， 导致实际浓度和上样量不一样。尿素提取蛋白不能用BCA法测浓度。
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3楼2013-11-14 15:54:20
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幸福小草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cloudrosy at 2013-11-14 15:54:20
尿素和 SDS 对同一种定量方法的干扰程度也可能是原因， 导致实际浓度和上样量不一样。尿素提取蛋白不能用BCA法测浓度。

用的考马斯亮蓝测的浓度，如果上样量一样的话，那对应的条带的深浅应该是一样的吧？
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4楼2013-11-14 18:49:01
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幸福小草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-12 22:52:37
这个很正常啊，你的是膜蛋白吧？？？

不是膜蛋白，可是上样量是一样的啊。
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5楼2013-11-14 18:53:23
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 幸福小草 at 2013-11-14 18:53:23
不是膜蛋白，可是上样量是一样的啊。...

1,测的是总蛋白的浓度。
2，SDS溶解你的蛋白更彻底，尿素没有完全溶解你的目的蛋白。
3，一般测蛋白方法都有局限性和偏差。
4，那你是做包涵体了，不然用不到尿素的吧。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
6楼2013-11-14 20:03:04
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forensic110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用Qubit仪器专业的测蛋白的试剂，测一下蛋白含量，调整上样，跑出来的就会好很多。或者用BCA的的定量试剂盒，但误差较大
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7楼2013-11-19 13:30:57
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louisa俊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们用的是改良的LORROY法测蛋白浓度
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8楼2013-11-19 15:00:45
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幸福小草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-11-19 15:00:45
我们用的是改良的LORROY法测蛋白浓度

你们用过考马斯亮蓝测浓度吗？会存在标准曲线不准确的情况吗？
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9楼2013-12-03 08:36:52
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