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求知的学生

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE样品处理已有10人参与

我现在刚接触SDS-PAGE,做了几次,效果不好。有问题想向大家请教一下。我用的浓缩胶是5%,分离胶是10%的。样品是血清,蛋白含量在40g/L左右。想问一下,样品应该怎么处理。我是取20微升样品与2x上样缓冲液混合等体积混合,沸水煮5min,再10000转离心,取上层10微升上样,不知道这样对不对,请大家不吝赐教,万分感谢。
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li3564617

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):学术交流 鼓励 2010-07-18 23:47:53
分离胶的浓度与蛋白质的分子量大小有关,一般生化试验书上都有,样品处理这样应该没问题
2楼2010-07-18 21:25:51
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1):此言有理 2010-07-18 23:48:08
方法参见molecular cloning
你说效果不好,具体是怎么个不好法?最好有图上来,看到图才能说明问题
3楼2010-07-18 23:41:32
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小周

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们都是沸水浴5min后,置冰上1min.
4楼2010-07-19 09:19:53
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ilxly

木虫 (小有名气)

没问题,大概都一样。你试过了吗,跑的怎么样
5楼2010-07-19 09:24:29
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求知的学生

金虫 (小有名气)

谢谢大家的热心解答,我再试一试,有问题再向各位请教。
6楼2010-07-19 10:27:35
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白格子衬衫

金虫 (小有名气)


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分子克隆3上边有~~
未及热爱,已然离开
7楼2010-07-19 10:48:22
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louli

铜虫 (小有名气)

你的蛋白分子量是多少啊  怎么用10%的分离胶呢?试试12%的吧
8楼2010-07-20 17:25:05
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yangjie86

金虫 (正式写手)

看看我的


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不能离心,要不蛋白质和SDS的结合物有被死死的固定在底部了,怎么有样品检测到。直接上样就行。样品和Loading buffer一比一混合煮沸就行了。再不行就是你的样品有问题了。
莫回头看背后的身影。
9楼2010-07-20 18:28:10
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changes

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有图片吗?学习学习。
你的蛋白分离范围?所用的电压?
10楼2010-07-20 20:21:37
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