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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE样品处理
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求知的学生

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE样品处理 已有10人参与

我现在刚接触SDS-PAGE，做了几次，效果不好。有问题想向大家请教一下。我用的浓缩胶是5%，分离胶是10%的。样品是血清，蛋白含量在40g/L左右。想问一下，样品应该怎么处理。我是取20微升样品与2x上样缓冲液混合等体积混合，沸水煮5min，再10000转离心，取上层10微升上样，不知道这样对不对，请大家不吝赐教，万分感谢。
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1楼 2010-07-18 21:02:42
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yangjie86

金虫 (正式写手)

看看我的

★
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不能离心，要不蛋白质和SDS的结合物有被死死的固定在底部了，怎么有样品检测到。直接上样就行。样品和Loading buffer一比一混合煮沸就行了。再不行就是你的样品有问题了。
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莫回头看背后的身影。
9楼2010-07-20 18:28:10
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li3564617

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2):学术交流 鼓励 2010-07-18 23:47:53
分离胶的浓度与蛋白质的分子量大小有关，一般生化试验书上都有，样品处理这样应该没问题
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2楼2010-07-18 21:25:51
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):此言有理 2010-07-18 23:48:08
方法参见molecular cloning
你说效果不好，具体是怎么个不好法？最好有图上来，看到图才能说明问题
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3楼2010-07-18 23:41:32
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
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我们都是沸水浴5min后，置冰上1min.
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4楼2010-07-19 09:19:53
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