24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1301  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

small521

银虫 (小有名气)


[交流] 同尾酶连接效率问题,求助

我有一个已经连接上载体的大片段,为xhoI连接,我的目的载体上面没有xhoI这个位点,但是有SalI,我打算利用这个同尾酶进行连接,不过因为载体自连,至今也没有筛到阳性,不知有没有做过同尾酶连接的大师帮我看看,我这么做有没有问题,还想问问这样的同尾酶连接有没有连上的可能,效率高不高?

还有,我是大片段连接,片段约12k,载体5k,连接起来比较费劲,不过前人已经有连接的成功案例,只是人家是双酶切,和我这有些不同,还有没有做过的高人指点一二,谢了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 10:24:24
small521: 金币+1 2013-11-07 13:13:18
去磷酸化后一般载体的自连可以降低到接近0。双酶切可以不用,单酶切的话一般是要取磷酸化的,否则自连的概率太高了。
4楼2013-11-06 07:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
small521: 金币+1 2013-11-05 16:05:33
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 18:15:30
XhoI  SalI同尾酶很好连接的, 载体自连是你载体去磷效果不好啊
2楼2013-11-05 16:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

small521

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by gaohuihui at 2013-11-05 16:00:41
XhoI  SalI同尾酶很好连接的, 载体自连是你载体去磷效果不好啊

我没有去磷酸化,因为我师兄说去了效果也不好,自连也会很多,而且会影响非自连的效率,那如果连接效率高的话那我就放心筛了,谢谢了
3楼2013-11-05 16:05:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +10 jhybd 2026-03-23 15/750 2026-03-29 21:49 by nanaliuyun
[考研] 材料科学与工程求调剂 +6 深V宿舍吧 2026-03-29 6/300 2026-03-29 20:51 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 8/400 2026-03-29 12:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 调剂求院校招收 +6 鹤鲸鸽 2026-03-28 6/300 2026-03-29 08:15 by fmesaito
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 343求调剂 +5 爱羁绊 2026-03-28 5/250 2026-03-28 20:53 by 唐沐儿
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 考研调剂 +10 呼呼?~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +5 SYA! 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
请填处理意见