[求助] 血清蛋白western上样内参

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1楼2013-11-03 15:52:44

cicelyzh

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【答案】应助回帖

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lgs1: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-11-04 13:29:24
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-04 14:07:28

没有做过你的样品。用丽春红染膜只要是看大量表达蛋白的情况。常用的内参的表达量也是很高的。所以可以看主要带是否灰度相同。但是由于样品的处理不同，有时候会造成某些大量表达蛋白的变化，但总有一些蛋白的表达还是不变你。你可以选择不受样品处理影响的蛋白做内参。

2楼2013-11-04 01:34:13

lgs1

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 01:34:13
没有做过你的样品。用丽春红染膜只要是看大量表达蛋白的情况。常用的内参的表达量也是很高的。所以可以看主要带是否灰度相同。但是由于样品的处理不同，有时候会造成某些大量表达蛋白的变化，但总有一些蛋白的表达还 ...

但是丽春红染色不是应该和全蛋白反应吗，扫描灰度的时候是不是应该整个泳道都扫下来呢，另外我的一个目的蛋白是70kd，和血清里面的高丰度蛋白很接近，所以样品都是去过高丰度的，这样是不是就没有蛋白能够作为内参了呢？谢谢

3楼2013-11-04 13:34:23

cicelyzh

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:46:45

引用回帖:

3楼: Originally posted by lgs1 at 2013-11-04 13:34:23
但是丽春红染色不是应该和全蛋白反应吗，扫描灰度的时候是不是应该整个泳道都扫下来呢，另外我的一个目的蛋白是70kd，和血清里面的高丰度蛋白很接近，所以样品都是去过高丰度的，这样是不是就没有蛋白能够作为内参 ...

丽春红染色不灵敏，只能看到丰度比较高的蛋白条带，而也正是这些丰度高的蛋白决定了总蛋白的多少。一般跑胶时也是按照上相同量总蛋白做的。因为你的样品是去掉高丰度蛋白的，所以你需要做内参。因为去高丰度蛋白时会很大程度上影响总蛋白，而且丽春红染色后也不容易判断是否上样量相同。

4楼2013-11-04 15:35:56

lgs1

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引用回帖:

4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 15:35:56
丽春红染色不灵敏，只能看到丰度比较高的蛋白条带，而也正是这些丰度高的蛋白决定了总蛋白的多少。一般跑胶时也是按照上相同量总蛋白做的。因为你的样品是去掉高丰度蛋白的，所以你需要做内参。因为去高丰度蛋白时 ...

那我应该用什么来做内参呢，按老板的意思就是用丽春红染色做内参，但是我也觉得不太好判断上样量是不是一样

5楼2013-11-06 09:45:33