应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 血清蛋白western上样内参
51/1返回列表
查看: 5201  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lgs1

木虫 (小有名气)

[求助] 血清蛋白western上样内参

最近需要做几个血清蛋白的western验证实验，由于没有内参，所以采用丽春红染色作为上样内参，但是重复做了好几次染出来的条带深浅都不是很一致，查了好几篇文献都只是在文中提了一句用丽春红作上样内参，没有说具体的判断方法，不知道是用的肉眼还是灰度扫描，而且有的时候文献里面两条染色明显有差异的条带也拿出来做内参，让人感觉很疑惑，希望大家能够指点一下丽春红染色作内参的注意事项，谢谢。下图是我染色后的pvdf膜
血清蛋白western上样内参
TM截图未命名.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-03 15:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 01:34:13
没有做过你的样品。用丽春红染膜只要是看大量表达蛋白的情况。常用的内参的表达量也是很高的。所以可以看主要带是否灰度相同。但是由于样品的处理不同，有时候会造成某些大量表达蛋白的变化，但总有一些蛋白的表达还 ...

但是丽春红染色不是应该和全蛋白反应吗，扫描灰度的时候是不是应该整个泳道都扫下来呢，另外我的一个目的蛋白是70kd，和血清里面的高丰度蛋白很接近，所以样品都是去过高丰度的，这样是不是就没有蛋白能够作为内参了呢？谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-04 13:34:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lgs1: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-11-04 13:29:24
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-04 14:07:28
没有做过你的样品。用丽春红染膜只要是看大量表达蛋白的情况。常用的内参的表达量也是很高的。所以可以看主要带是否灰度相同。但是由于样品的处理不同，有时候会造成某些大量表达蛋白的变化，但总有一些蛋白的表达还是不变你。你可以选择不受样品处理影响的蛋白做内参。
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-04 01:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:46:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by lgs1 at 2013-11-04 13:34:23
但是丽春红染色不是应该和全蛋白反应吗，扫描灰度的时候是不是应该整个泳道都扫下来呢，另外我的一个目的蛋白是70kd，和血清里面的高丰度蛋白很接近，所以样品都是去过高丰度的，这样是不是就没有蛋白能够作为内参 ...

丽春红染色不灵敏，只能看到丰度比较高的蛋白条带，而也正是这些丰度高的蛋白决定了总蛋白的多少。一般跑胶时也是按照上相同量总蛋白做的。因为你的样品是去掉高丰度蛋白的，所以你需要做内参。因为去高丰度蛋白时会很大程度上影响总蛋白，而且丽春红染色后也不容易判断是否上样量相同。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-04 15:35:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 15:35:56
丽春红染色不灵敏，只能看到丰度比较高的蛋白条带，而也正是这些丰度高的蛋白决定了总蛋白的多少。一般跑胶时也是按照上相同量总蛋白做的。因为你的样品是去掉高丰度蛋白的，所以你需要做内参。因为去高丰度蛋白时 ...

那我应该用什么来做内参呢，按老板的意思就是用丽春红染色做内参，但是我也觉得不太好判断上样量是不是一样
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-06 09:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:36 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:03 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:56 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:45 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:34 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭