[求助] 血清WB操作步骤

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1楼2012-12-05 23:22:43

zx1984

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你是要直接用血清做，还是先提蛋白再做？

2楼2012-12-06 08:27:51

生物小通

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2楼: Originally posted by zx1984 at 2012-12-06 08:27:51
你是要直接用血清做，还是先提蛋白再做？

两个都行，关键是提蛋白怎么提，提出来怎样平衡是提取的血清量的不同还是表达量的不同导致了最终的wb结果，管家基因只能出结果的时候才知道。

学习，进步

3楼2012-12-06 09:10:41

jl860822

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先提取血细胞，然后抽取蛋白

4楼2012-12-06 11:34:46

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4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-12-06 11:34:46
先提取血细胞，然后抽取蛋白

我用血清，血细胞在促凝管中已经分离了

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5楼2012-12-06 16:18:58

gaorongbest

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生物小通: 金币+5, ★有帮助 2012-12-10 11:45:49

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3楼: Originally posted by 生物小通 at 2012-12-06 09:10:41
两个都行，关键是提蛋白怎么提，提出来怎样平衡是提取的血清量的不同还是表达量的不同导致了最终的wb结果，管家基因只能出结果的时候才知道。...

“出来怎样平衡是提取的血清量的不同还是表达量的不同导致了最终的wb结果”这个很简单啊，这是看你用的抗体是什么抗体，然后根据内参来相对定量你的抗体所对应的蛋白含量，跟提取量没有绝对关系，只是提取量少难以检测罢了

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6楼2012-12-07 15:05:32

zx1984

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5楼: Originally posted by 生物小通 at 2012-12-06 16:18:58
我用血清，血细胞在促凝管中已经分离了...

用相同量的血清，离心得到沉淀，然后用RIPA破碎细胞，得到粗蛋白。有专门的试剂盒做核蛋白。

7楼2012-12-07 16:31:50

生物小通

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7楼: Originally posted by zx1984 at 2012-12-07 16:31:50
用相同量的血清，离心得到沉淀，然后用RIPA破碎细胞，得到粗蛋白。有专门的试剂盒做核蛋白。...

我做肝癌的血清标志物分析，做血清，不要细胞。

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8楼2012-12-07 16:49:25

生物小通

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6楼: Originally posted by gaorongbest at 2012-12-07 15:05:32
“出来怎样平衡是提取的血清量的不同还是表达量的不同导致了最终的wb结果”这个很简单啊，这是看你用的抗体是什么抗体，然后根据内参来相对定量你的抗体所对应的蛋白含量，跟提取量没有绝对关系，只是提取量少难以 ...

这个好难，做了一次，按照样品4:1的比例处理，结果点样时发现样品都凝固了。你知道有啥好方法，怕稀释到时候看不到条带了

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9楼2012-12-07 17:01:59

haodanfeng

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生物小通: 金币+10, ★★★很有帮助, 我试试看 2013-01-15 14:53:56

按照样品4:1的比例处理，然后加少量的甘油，之后离心上样

10楼2013-01-14 11:06:59